発がんにおけるDNA N6メチルアデノシンの意義：がん治療の新規作用点となるか？

DNA N6 甲基腺苷在致癌作用中的意义：它能否成为癌症治疗的新作用点？

• 批准号: 20J01824
• 负责人: 小林 良祐
• 金额: $ 3.08万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-24 至 2023-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20J01824/
• 关键词: メチル化; CRISPR; がん; エピジェネティクス

原核細胞生物のゲノムではN6メチルアデノシンは主要なDNAメチル化修飾であるのに対し、ヒトやマウスなどの哺乳動物細胞では、DNA中のN6メチルアデノシン存在量はきわめて少なく、その生物学的意義はほとんどわかっていない。最終年度となる2022年度はがん遺伝子やがん抑制遺伝子の候補についてin vivoで機能解析を行うための手法として、子宮内膜in vivoゲノム編集法の確立をさらに進めた。複数のがん抑制遺伝子を同時にゲノム編集することにより３ヶ月で子宮がんを誘発できること、標的とする遺伝子を変更することにより性質の異なるがんを作製できることを示し、国際学術誌に報告した（Kobayashi et al., 2022, Int J Cancer）。しかし昨年に報告した通り、上記手法でDNA N6メチルアデノシン関連遺伝子のノックアウトを試みても明確な発がん促進や抑制の証拠は得られていない。哺乳動物細胞において、N6メチルアデノシン修飾はゲノムDNAよりむしろRNA中に豊富に存在する。RNAにおけるN6メチルアデノシン修飾とがんとの関連を調査するため、子宮特異的Mettl14（RNA N6メチルアデノシン転移酵素）ノックアウトマウスを作製した。Mettl14ノックアウトマウスでの子宮がん発症は現在まで認められていないが、子宮では自然免疫活性化による炎症反応促進が認められ、このマウスは着床不全による不妊の表現型を呈した。現在は免疫活性化および着床不全の原因について分子生物学的解析を進めている。

Prokaryote organisms need to be modified mainly by DNA modification. Mammalian cells need to be modified by DNA modification. The amount of N6 in DNA needs to be reduced. The biological significance of DNA modification needs to be improved. The final year is 2022, and the candidate for inhibiting the gene is in vivo, and the functional analysis is in vivo. The method of editing the endometrium is established. The number of suppression genes must be compiled simultaneously, and the number of inhibition genes must be changed.(Kobayashi et al., 2022, Int J Cancer）。In the past year, we have reported that DNA N6 gene expression is related to gene expression, and we have tried to clarify the development of gene expression, promote gene expression and inhibit gene expression. Mammalian cells are rich in DNA and RNA. RNA N6 protein modification and its association were investigated. Uterine specific Mettl14 (RNA N6 protein enzyme) was used to control the expression of RNA. Mettl14: Uterine development is now recognized as an inflammatory response to natural immune activation of the uterus, which is a phenotype of infertility. Now, the analysis of molecular biology on the causes of immune activation and incomplete implantation is advancing.

项目成果

Efficient Detection of Flox Mice Using In Vitro Cre Recombination

利用体外 Cre 重组有效检测 Flox 小鼠

• DOI: 10.1007/978-1-0716-3016-7_12
• 发表时间: 2023
• 期刊: Methods in Molecular Biology
• 作者: Kobayashi Ryosuke;Horii Takuro;Hatada Izuho
• 通讯作者: Hatada Izuho

生体内ゲノム編集による効率的な子宮癌発症マウス作出法

利用体内基因组编辑产生子宫癌小鼠的有效方法

• 发表时间: 2021

ヒト子宮内膜がん細胞におけるKMT2変異の意義

人子宫内膜癌细胞中KMT2突变的意义

• 发表时间: 2022
• 作者: 小林良祐;川端麗香;杉山真言;横堀武彦;森田純代;堀居拓郎;西山正彦;畑田出穂
• 通讯作者: 畑田出穂

Improvement in identification of pro-estrous mice by using a novel method of detecting vaginal mucous cells.

通过使用检测阴道粘液细胞的新方法改进发情前小鼠的识别。

• DOI: 10.1007/s00441-020-03310-w
• 发表时间: 2021
• 期刊: Cell and tissue research
• 影响因子: 3.6
• 作者: Makoto Sugiyama;Arata Yasunaga;Ryosuke Kobayashi;Hanae Fukasawa;Osamu Hashimoto;Shiro Kurusu;Hiroshi Sasada;Kazuki Yoshioka
• 通讯作者: Kazuki Yoshioka

2ステップ法によるfloxマウス作製支援の状況と効率化に向けた試み

采用两步法生产flox小鼠的现状及提高效率的尝试

• 发表时间: 2021
• 作者: 小林 良祐;堀居 拓郎;末友 恵理子;木村 美香;森田 純代;畑田 出穂
• 通讯作者: 畑田 出穂