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溶連菌による天然変性蛋白質を介した宿主ホスホイノシタイドシグナル攪乱機構の解明

阐明链球菌自然变性蛋白介导的宿主磷酸肌醇信号干扰机制

基本信息

批准号：
20J15080
负责人：
藤博貴
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-24 至 2022-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度では、溶連菌毒素Ngaによる宿主リン脂質ホスホイノシタイドへの撹乱機構の背景にあると考えられる宿主分子の同定を試みた。Ngaと相互作用する宿主分子の網羅的な同定を目的としてショットガンプロテオミクスを実施した。具体的には、HeLa細胞に一過的にmClover3との融合タンパク質としてNgaを発現させ、GFP-trapを用いた免疫沈降によりNgaと相互作用分子を精製し、質量分析を用いて網羅的に同定した。その結果、同定された候補分子の中には、宿主の細胞骨格分子が含まれていた。この細胞骨格分子との相互作用については、再度HeLa細胞に発現させ、免疫沈降とWestern blotを用いた実験でも再現され、非特異的な相互作用でないことが確認された。さらに、既知のタンパク質間相互作用がまとめられている生物学データベースであるString databaseを用いて、今回推定された相互作用分子群の機能的解析を実施したところ、同定された多くの分子のGene ontology (生物学的プロセス)が宿主細胞におけるタンパク質合成を担う翻訳経路にあることを見出した。そこで、アミノアシルtRNAと構造が似ていることで翻訳中のリボソームに取り込まれるPuromycin の性質を用いた新規合成タンパク質の定量法SUnSET（Surface sensing of translation）法を用いて、溶連菌感染時におけるNgaによる宿主翻訳系への影響を確認した。その結果、Ngaによって宿主の新規タンパク質合成が低下していることが明らかとなった。したがって、溶連菌毒素Ngaには、細胞骨格との相互作用および宿主翻訳系に対する抑制機構を有することが示唆された。これらの知見は、溶連菌毒素Ngaによる宿主への未知の撹乱機構を解明するための有用な情報となると考えられる。

This year, the identification of host molecules was tested. Nga interaction with host molecules is a common goal. Specific mClover3 fusion proteins were identified by immunoprecipitation and mass spectrometry. The results of this study are consistent with the results of the study, and the results of this study are consistent with the results of the study. The interaction between these cell-based molecules was detected in HeLa cells again, and immunoprecipitation and Western blot were used to reproduce and confirm non-specific interactions. The analysis of the function of the interacting molecular group is carried out by using the String database, which is known to be used for the analysis of the mass-to-mass interaction between the known molecules and the host cells. The structure of Puromycin was determined by Surface sensing of translation (SUNSET) method. The effect of Nga on the host system was confirmed. As a result, the host's new quality synthesis is low. The interaction between lysozyme Nga and cytoskeleton and the inhibition mechanism of host system are discussed. This information is useful for understanding, understanding, understanding.

项目成果

期刊论文数量（6）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Group A Streptococcus modulates RAB1- and PIK3C3 complex-dependent autophagy

DOI：
10.1080/15548627.2019.1628539
发表时间：
2020-02
期刊：
Autophagy
影响因子：
13.3
作者：
Hirotaka Toh;T. Nozawa;Atsuko Minowa‐Nozawa;Miyako Hikichi;Shintaro Nakajima;Chihiro Aikawa;I. Nakagawa
通讯作者：
Hirotaka Toh;T. Nozawa;Atsuko Minowa‐Nozawa;Miyako Hikichi;Shintaro Nakajima;Chihiro Aikawa;I. Nakagawa

A群レンサ球菌の毒素NAD-glycohydrolaseは宿主翻訳機構を阻害する

A 组链球菌毒素 NAD-糖水解酶抑制宿主翻译机制