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小分子結合ペプチドの分子進化工学的スクリーニング探索とバイオイメージングへの応用

分子进化工程筛选小分子结合肽及其在生物成像中的应用

基本信息

批准号：
20J22783
负责人：
山本美月
金额：
$ 1.79万
依托单位：
University of Yamanashi
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-24 至 2023-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

これまでに、PURE（Polypeptide synthesis Using Recombinant Elements）システムにより調製した数兆種類のcDNAディスプレイ型ペプチドタグライブラリーからのSELEXスクリーニングにより同定した新規小分子結合ペプチドタグについて、動物細胞内に発現させた合成小分子反応性ペプチドタグ融合タンパク質を、蛍光プローブで修飾した合成小分子で処理し、蛍光顕微鏡観察を行なった結果、合成小分子反応性ペプチドタグに特異的に蛍光ラベルがされていること、複数種類の動物細胞株（HEK293、COS-7、HeLa等）内で蛍光ラベル・イメージングが可能であること、様々なタンパク質（核局在GFP、チューブリン、ヒストン等）を蛍光ラベル・イメージング可能であること、複数種類の蛍光プローブ（青色クマリン、緑色フルオレセイン、赤色TMR、近赤外SiR等）で蛍光ラベル・イメージング可能であることが判明していた。そこで更に、動物細胞内に発現させた合成小分子反応性ペプチドタグ融合タンパク質を、ユビキチンリガーゼ結合リガンドで修飾した合成小分子で処理し、蛍光顕微鏡観察や免疫ブロッティング、発光測定による解析を行なった結果、様々なタンパク質（GFP、核局在GFP、アクチン、チューブリン、ヒストン、ルシフェラーゼ等）の分解誘導によるノックダウンが可能であること、複数種類の動物細胞株（HEK293、COS-7、HeLa等）内で分解誘導によるノックダウンが可能であることが判明した。本研究成果は、日本農芸化学会2023年度大会および第74回日本生物工学会大会の学会で成果発表を行なっている。

これまでに、PURE (Polypeptide synthesis Using Recombinant Elements) The synthesis of synthetic small molecules is a novel method for the synthesis of small molecules. The synthesis of small molecules is a novel method for the synthesis of small molecules. Microscopic observation results of synthetic small molecules and their anti-inflammatory properties. Specific micromolecules and animal cell lines.(HEK293, COS-7, HeLa, etc.)(Nuclear authority in GFP, green, red, etc.) can be identified as a variety of types of light (cyan, green, red, red, etc.). In addition, the synthesis of small molecules produced in animal cells, the synthesis of small molecules, the detection of small molecules, the detection of small molecules, the analysis of small molecules, the detection of small molecules.(GFP, NPA, GFP, COS-7, HeLa, etc.) in a variety of animal cell lines (HEK293, COS-7, HeLa, etc.). The results of this research are presented at the 2023 Annual Conference of Japan Agricultural Chemical Society and the 74th Annual Conference of Japan Biological Engineering Society.

项目成果

期刊论文数量（24）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

新規小分子結合ペプチドタグの開発と生細胞内タンパク質イメージングおよびノックダウンへの応用

新型小分子结合肽标签的开发及其在活细胞内蛋白质成像和敲除中的应用

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
山本美月;安東丈洋;高守幸男;Vedi Santhana;佐藤将;横山匠;冨士大輔;川上隆史
通讯作者：
川上隆史

PUREシステムとmRNAディスプレイ法を用いた新規PD-L1/PD-1間相互作用阻害剤の探索と機能解析

使用 PURE 系统和 mRNA 展示方法搜索新型 PD-L1/PD-1 相互作用抑制剂并进行功能分析

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
安東丈洋;横山匠;岩本莉奈;冨士大輔;山本美月;川上隆史
通讯作者：
川上隆史

In?vitro display evolution of IL-6R-binding unnatural peptides ribosomally initiated and cyclized with m-(chloromethyl)benzoic acid

核糖体引发并用间（氯甲基）苯甲酸环化的 IL-6R 结合非天然肽的体外展示进化

DOI：
10.1016/j.bbrc.2020.11.123
发表时间：
2021
期刊：
Biochemical and Biophysical Research Communications
影响因子：
3.1
作者：
Takamori Yukio;Ando Takehiro;Fuji Daisuke;Yokoyama Takumi;Yamamoto Mizuki;Kawakami Takashi
通讯作者：
Kawakami Takashi

血管新生阻害のための新規VEGFR2/VEGF間相互作用阻害剤の探索と機能解析

抑制血管生成的新型 VEGFR2/VEGF 相互作用抑制剂的搜索和功能分析