ナノ秒パルスを用いたマルチパルスエレクトロポレーターの開発

使用纳秒脉冲的多脉冲电穿孔器的开发

基本信息

  • 批准号:
    20K04458
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.66万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    2020
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2020-04-01 至 2024-03-31
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

昨年度より開始したCHO(チャイニーズハムスター卵巣細胞)を対象に,ナノ秒パルスとミリ秒パルスの与え方,懸濁液の組成などを変化し,電気ダメージの大小やGFP発現個数の多寡を調査した。最初に印加するポアリングパルス(PP)としてパルス幅・電圧が100 ns,2.0 kVのナノ秒高電圧,PP後に1 msのインターバルを経た後,印加するトランスファーパルス(TP)としてパルス幅・電圧が10,30,50 ms,60,70,80,90 Vと大きく変化したミリ秒低電圧パルスを組み合わせパルスとしてGFPの導入実験を行った。はじめに印加するパルスをPPのみ,TPのみ,PP+TPの組み合わせパルスとして実験を行い,PPのみでは導入はできないこと,TPのみでパルス幅や電圧が長く高くなるにつれてGFPの導入が確認できた。しかし,TPの前にPPを組み合わせた場合,TPのみに比べGFPの導入個数が格段に増加することが確認でき,ナノ秒高電圧のPPとしての効果が確認できた。次に,これまでの細胞(HL-60,RAW264.7)と同様に組み合わせパルス条件毎のCHO細胞の状況(影響なし,良好な導入,ダメージ大)を,TPパルスのエネルギーを横軸,同パルスの電界(=電圧/キュベットのギャップ長)を縦軸としてプロットし,良好な導入ができる組み合わせパルスの最適条件の範囲が判明した。プロットによるとCHOの最適条件領域はRAW264.7とほぼ同等であることが分かった。新しい細胞種として導入が困難とされるTHP-1の培養と導入実験を開始した。
Yesterday's year started with CHO (チャイニーズハムスターovum cells) を対肖に, ナノseconds パルスとミリsecondsパルスの与え方, the composition of the suspension was changed, and the size and size of the electrolyte was determined and the number of GFP was present was investigated. The initial high voltage of Inca するポアリングパルス(PP)としてパルス・electric pressure is 100 ns, 2.0 kV のナノ second high voltage, PP after 1 msのインターバルを経た后,Incaするトランスファーパルス(TP)としてパルス片・电姧が10,30,50 ms,60,70,80,90 Vと大きく変化したミリsecond low voltage パルスを组み合わせパルスとしてGFPの Import 実験を行った.はじめにINDICA するパルスをPPのみ,TPのみ,PP+TPの组み合わせパルスとして実験を行い,PPのみでは Import はできないこと, TP のみでパルス片や电姧が长く高くなるにつれてGFPの Import がconfirmation できた.しかし, TPの前にPPを组み合せた occasion, TPのみに比べGFPの Import numberがThe grid section is increased and the effect is confirmed. The effect of high voltage in seconds is confirmed. Secondary cell (HL-60, RAW264.7) and the same 様に集团み合わせパルスConditions for each CHO cell condition (influence, good introduction, large size), TP level The エネルギーをhorizontal axis is the same as the パルスの电界 (=电姧/キュベットのギャップlength)を縦axisとしてプロットし, good な import ができる group み合わせパルスの optimal condition のfan囲が clarified した.プロットによるとCHOのoptimal condition fieldはRAW264.7とほぼequivalentであることが分かった. The introduction of the new cell species was difficult and the culture of THP-1 was started.

项目成果

期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
GFP Introduction for RAW264.7 Cells by Combining Nanosecond High Voltage Pulse and Millisecond pulse
结合纳秒高压脉冲和毫秒脉冲将 GFP 引入 RAW264.7 细胞
  • DOI:
    10.1109/ppc40517.2021.9733150
  • 发表时间:
    2021
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    茂木雄斗 ; 伊藤暢彦 ; 大田健紘 ; 平栗健史 ; 山本 幹 ; 吉野秀明;河野佑弥,柿ヶ野浩明;Susumu Kono; Nobuaki Tominaga
  • 通讯作者:
    Susumu Kono; Nobuaki Tominaga
ナノ秒高電圧パルスを用いたマルチパルスエレクトロポレーション技術によるCHO細胞へのGFPベクター導入実験
使用纳秒高压脉冲的多脉冲电穿孔技术将 GFP 载体引入 CHO 细胞实验
  • DOI:
  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    河野 晋;松本 光二朗;渥美 優介;明日山 康生;冨永 伸明
  • 通讯作者:
    冨永 伸明
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  • 通讯作者:
    河野 晋
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  • 发表时间:
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  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Susumu Kono;Nobuaki Tominaga;河野 晋;永井匠,池松裕人,山口明美,冨永伸明,河野晋;永井 匠,池松 裕人,冨永 伸明,河野 晋
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