Antigen affinity-dependent regulation of B cell antigen receptor signaling

B 细胞抗原受体信号传导的抗原亲和力依赖性调节

• 批准号: 20K05231
• 负责人: 金山 直樹
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K05231/
• 关键词: DT40; affinity; antibody; B cell receptor; 抗体; 抗原レセプター; カルシウムシグナル; 親和性

本研究では、抗原レセプターと抗原との親和性に依存したシグナル調節機構を明らかにして、生体内の抗体産生系の新規な細胞選択機構を見し、これを応用して抗原レセプターシグナルの強度を細胞生存シグナルの強度に変換し、生体内での高親和性抗体の高効率な選択機構を模倣する技術を開発する。本研究では、DT40細胞を用いて抗原への親和性に依存した抗原レセプターシグナル調節機構を解明し、この知見を利用した有用な目的抗体の高効率選択技術を開発する。抗原レセプター刺激に依存して誘導されるNR4A1 (nuclear receptor 4A1)の転写に必要なシグナル経路ついて、プロモーターに蛍光タンパク質遺伝子を連結したレポーターを用いて前年度に引き続いて詳細に関与するシグナル伝達経路について探索した。その結果、前年度までに明らかにしていたカルシニューリンだけでなく、PKC下流のMAPK経路も関与していることを明らかにした。最終的な遺伝子の発現調節領域の同定とシグナル経路の関与も解析を進めている。抗原レセプター刺激に依存して発現される遺伝子について、公的データベース上のDT40細胞を用いた関連研究のトランスクリプトーム解析データから絞り込んだ遺伝子群を、本研究の実験系において検証して発現誘導される候補遺伝子を同定した。前年度までに、これらの発現誘導には、カルシウムシグナル下流の異なるシグナル経路関与していることを見出していたが、BCRの刺激強度の違いによっても用いるシグナル経路の寄与が変化することを見出した。今後、これらの遺伝子のレポーター系を構築して、BCRの親和性認識の検出に有用な遺伝子を決定する。

在这项研究中，我们将阐明基于抗原受体和抗原之间的亲和力的信号调节机制，并查看体内抗体生产系统中的新细胞选择机制，并使用它来将抗原受体信号的强度转化为细胞存活信号的强度，并开发出高效选择的高度选择机制的技术。在这项研究中，我们将阐明使用DT40细胞对抗原的亲和力的抗原受体信号调节的机制，并使用此发现来开发高效的选择技术来进行有用的靶抗体。使用荧光蛋白基因链接到启动子链接的报告基因详细探讨了依赖于抗原受体刺激的NR4A1（核受体4A1）所需的信号途径。结果，揭示了不仅揭示了前一年的钙调神经素，而且还涉及PKC下游的MAPK途径。最终基因表达调节区域的鉴定和信号途径的参与也正在分析。对于取决于抗原受体刺激的基因，我们检查了本研究实验系统中使用DT40细胞的转录组分析数据缩小的基因，从相关研究中缩小了数据，以鉴定鉴定被诱导表达的候选基因。直到上一年，我们发现这些表达诱导涉及钙信号下游的不同信号途径，但我们还发现，信号途径的贡献取决于BCR的刺激强度。将来，将构建这些基因的记者系统，以确定可用于检测BCR亲和力识别的基因。

项目成果

B細胞抗原レセプターシグナル誘導性分子の発現に必要なシグナル伝達経路

B细胞抗原受体信号诱导分子表达所需的信号转导途径

• 发表时间: 2022
• 作者: 安福 希 ; 伊藤 雄大 ; 小野 和奏 ; 大塚 里美 ; 曲 正樹 ; 波多野 直哉 ; 徳光 浩 ; 金山 直樹
• 通讯作者: 金山 直樹

188抗原レセプターシグナル依存的に発現するオーファンレセプターNR4A1のB細胞における発現制御機構の解明

阐明 B 细胞中以 188 抗原受体信号依赖性方式表达的孤儿受体 NR4A1 的表达控制机制

• 发表时间: 2020
• 作者: 秋山 美咲;大森 晴斗;梶浦 雄也;石橋 朋之;久原 亜弓;曲 正樹;波多野 直哉;徳光 浩;金山 直樹;野田凌太郎，曲 正樹，徳光 浩，金山直樹
• 通讯作者: 野田凌太郎，曲 正樹，徳光 浩，金山直樹

抗原レセプターシグナル依存的に発現するオーファンレセプターNR4A1のB細胞における発現制御機構の解明

阐明 B 细胞中以抗原受体信号依赖性方式表达的孤儿受体 NR4A1 的表达控制机制

• 发表时间: 2022
• 作者: 伊藤 雄大 ; 野田 凌太郎 ; 長門 直希 ; 安福 希 ; 大塚 里美 ; 曲 正樹 ; 波多野 直哉 ; 徳光 浩 ; 金山 直樹
• 通讯作者: 金山 直樹

Substrate recognition by Arg/Pro‐rich insert domain in calcium/calmodulin‐dependent protein kinase kinase for target protein kinases

• DOI: 10.1111/febs.16467
• 发表时间: 2022-05
• 期刊: The FEBS Journal
• 作者: Riku Kaneshige;Satomi Ohtsuka;Yuhei Harada;Issei Kawamata;M. Magari;N. Kanayama;N. Hatano;H. Sakagami;H. Tokumitsu

Conformation-Dependent Reversible Interaction of Ca2+/Calmodulin-Dependent Protein Kinase Kinase with an Inhibitor, TIM-063

Ca2/钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶与抑制剂 TIM-063 的构象依赖性可逆相互作用

• DOI: 10.1021/acs.biochem.1c00796
• 发表时间: 2022
• 期刊: Biochemistry
• 影响因子: 2.9
• 作者: Araya Kibrom Desta;Shuji Ohira;Ismail Arai;Kazutoshi Fujikawa;Satomi Ohtsuka;Taisei Okumura;Yuna Τabuchi;Tomoyuki Miyagawa;Naoki Kanayama;Masaki Magari;Naoya Hatano;Hiroyuki Sakagami;Futoshi Suizu;Teruhiko Ishikawa;Hiroshi Tokumitsu
• 通讯作者: Satomi Ohtsuka;Taisei Okumura;Yuna Τabuchi;Tomoyuki Miyagawa;Naoki Kanayama;Masaki Magari;Naoya Hatano;Hiroyuki Sakagami;Futoshi Suizu;Teruhiko Ishikawa;Hiroshi Tokumitsu