里氏木霉纤维素酶cbh基因表达系统调控蛋白分析

木霉cbh表达系统是微生物中表达能力最强的分泌表达系统之一，非常适合用于真核生物蛋白特别是高等哺乳动物蛋白的高效分泌表达，具有重大理论意义和潜在应用价值。但目前人们对该系统高效表达调控机制了解甚少。本研究将尝试建立一套新的方法，即采用串联亲和层析技术（Tandem Affinity Purification，TAP）并结合液质联用质谱，以木霉cbh表达的转录因子ACEⅡ、ACEⅠ、CreⅠ等作为"诱饵"蛋白，在木霉cbh的不同表达状况下的全细胞裂解物中，"钓"出和这些"诱饵"蛋白相互作用并能够调节纤维素酶表达的蛋白，在质谱仪上利用已注释的T.reesei基因组数据库直接识别出这些调控蛋白质，确定在表达启动过程中关键调控蛋白。将进一步通过酵母双杂交、基因敲除、体内重组等技术对这些调控蛋白进行功能分析，探索这些调控蛋白的调控机制，这将有助于我们进一步了解木霉cbh表达系统高效调控机制。