MRNによる相同組換え開始機構の生化学的解析

ヒトMRE11/RAS50/NBS1（MRN）は放射線や抗がん剤により引き起こされるDNA二本鎖切断の修復に必須の役割を担うヌクレアーゼ複合体である。DNA二本鎖切断が相同組換えにより修復される際、MRNの働きがどのように制御されているか、またMRNと共に働くとされる複数のヌクレアーゼやDNA結合タンパク質がどのように協調的に働いているかは未だ不明な点が多い。本研究ではMRNの働きを起点に相同組換え開始に働くタンパク質群の働きを、主として生化学・生物物理学的手法を用いて明らかにすることを目的とする。本年度はMRNの蛋白質構造におけるRAD50のフックモチーフの機能解析のため、酵母を用いた遺伝学的解析を行なった。また相同組換えで働くRAD51蛋白質を負に制御するとされるFIGNL1蛋白質を精製し、ATPase活性などの生化学的性質を調べるとともにRAD51を始めとした相同組換え蛋白質との相互作用を調べた。またこれまで精製したRAD51蛋白質を制御するメディエーターやアンチリコンビナーゼがRAD51のDNA結合能や組換え活性に及ぼす影響を調べた。また今後、クライオ電顕によるDNA結合蛋白質複合体の構造解析を行うことを目指し、ネガティブ染色による相同組換え蛋白質の電子顕微鏡観察条件検討を行なった。

ヒトMRE11/RAS50/NBS1（MRN）は放射線や抗がん剤により引き起こされるDNA二本鎖切断の修復に必須の役割を担うヌクレアーゼ複合体である。DNA二本鎖切断が相同組換えにより修復される際、MRNの働きがどのように制御されているか、またMRNと共に働くとされる複数のヌクレアーゼやDNA結合タンパク質がどのように協調的に働いているかは未だ不明な点が多い。本研究ではMRNの働きを起点に相同組換え開始に働くタンパク質群の働きを、主として生化学・生物物理学的手法を用いて明らかにすることを目的とする。本年度はMRNの蛋白質構造におけるRAD50のフックモチーフの機能解析のため、酵母を用いた遺伝学的解析を行なった。また相同組換えで働くRAD51蛋白質を負に制御するとされるFIGNL1蛋白質を精製し、ATPase活性などの生化学的性質を調べるとともにRAD51を始めとした相同組換え蛋白質との相互作用を調べた。またこれまで精製したRAD51蛋白質を制御するメディエーターやアンチリコンビナーゼがRAD51のDNA結合能や組換え活性に及ぼす影響を調べた。また今後、クライオ電顕によるDNA結合蛋白質複合体の構造解析を行うことを目指し、ネガティブ染色による相同組換え蛋白質の電子顕微鏡観察条件検討を行なった。