静水圧メカノシグナル制御とその組織工学への応用

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無細胞系においては，Rasの活性化をFRET強度の変化でモニターできるRaichuをもちいて、Ras活性化の静水圧感受性の検出とメカニズム解明を目指した研究を進めている。2020年度までにRaichuの単離精製とこれを用いたRas活性化の測定ができるようになっていたが、静水圧感受性のシグナルをより定量的に測定できるよう、実験測定系の改良が進んだ。またRasGEFおよびGAPを測定系に組み込むことにも成功した。また、過大静水圧下においた軟骨細胞の網羅的遺伝子発現解析を行うことにより、静水圧下での培養によりホスホリパーゼの発現が変動していたことから、培養上清の遊離脂肪酸組成の解析を行った。さらに、前年度までに開発した、軟骨細胞に静水圧だけでなく、同時に圧縮応力を負荷することのできるシステムに改良を加え、静水圧と圧縮応力負荷のタイミングを変化させながら、軟骨細胞の遺伝子発現変化について検証を行った。そして、再生軟骨の評価系として、これまでに日本白色家兎並びにラットを用いた異種同所性移植モデルによるin vivo有効性評価法を確立し、両動物種での修復再生効果の同等性を確認した。本研究における動物実験系をラットに決定後、静水圧負荷技術により作製された再生軟骨組織を用いた場合の移植方法や手技について検討した。