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イヌiPS細胞を用いたin vitro炎症性腸疾患モデルの病態解明・創薬への応用

犬iPS细胞体外炎症性肠病模型在病理阐明和药物研发中的应用

基本信息

批准号：
19J22851
负责人：
塚本雅也
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Osaka Prefecture University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-25 至 2022-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

消化管で慢性的な炎症が生じるイヌ炎症性腸疾患の病因は明らかではなく、その病態解明が望まれている。また、難治性症例に対して、生体から採取した間葉系幹細胞（MSC）を投与する、MSC投与療法が新たな治療法として注目されている。しかし、MSC投与療法は有効性および作用機序が完全には解明されておらず、またドナー不足など問題点もある。そこで本研究では、1.イヌ人工多能性幹細胞（iPS細胞）から消化管組織（腸オルガノイド）の誘導と、それを用いた炎症性腸疾患の病態再現および病態解明、および2.イヌiPS細胞からのMSC誘導によるドナー不足の解消を目的とした。本年度は以下の成果が得られた。1.　これまでマウス由来細胞をフィーダー細胞として使用することで、イヌiPS細胞は作製されてきた。しかし、それらの生体由来成分は性質が一定ではなく、研究の再現性を低下させる。そこでマウス由来細胞を用いないフィーダーフリー条件でのイヌiPS細胞の作製を試みた。昨年度に有用性が明らかとなったセンダイウイルスベクターを用いて初期化遺伝子を導入することで、胎子線維芽細胞のみならず成犬細胞からもフィーダーフリー条件でイヌiPS細胞を作製することができた。2.　消化管などの内胚葉組織は、胚体内胚葉を起源としている。そこで、イヌiPS細胞から効率的な胚体内胚葉への誘導方法を検討した。その結果、播種細胞数と誘導期間を最適化し、細胞凝集塊を形成後、高濃度Activin Aと血清代替物を添加して培養することで、胚体内胚葉を効率よく誘導できた。3.　イヌiPS細胞から高品質なMSCを誘導するために、その分化方法を検討した。その結果、尿由来細胞より作製したイヌiPS細胞から神経堤細胞を介してMSCを誘導した際に、高品質なMSCが得られた。

The cause of chronic inflammation of the digestive tract is the cause of inflammatory bowel disease, and the pathological explanation is the hope.また、Refractory disease cases に対して、Biological したMesenchymal stem cell (MSC) administration する、MSC administration therapy がNew treatment method としてAttention されている. The efficacy of MSC injection therapy and the mechanism of action are complete and the problem points are clear and insufficient.そこでThe purpose of this study is: 1. Induction of artificial pluripotent stem cells (iPS cells) and digestive tract tissue (intestinal tissue), and inflammation using それをThe pathological reproduction of symptomatic intestinal diseases is explained by the pathological explanation, and the purpose of eliminating the deficiency of iPS cells and MSC induction is solved. The following achievements this year were achieved. 1. The cells from which the cells are derived, the cell cells, are produced using cells from the cells of the cell system, iPS cells.しかし、それらのThe nature of the ingredients derived from the organism is certain and the reproducibility of the research is low. The cells derived from そこでマウス are produced and tested using いないフィーダーフリーconditions and iPS cells. The usefulness of last year was the use of the initial transformation of the early stage of the introduction of the することとSub-line vegetative cells, adult cells, canine cells, conditions, iPS cells, and production. 2. The endodermal tissue of the digestive tract and the origin of the endodermal tissue of the embryo.そこで、イヌiPS cells からThe efficiency of endoembryonic leaf induction method is を検した. As a result, the number of seeded cells and the induction period were optimized, and after the formation of cell aggregates, high-concentration Activin A and serum substitute were added, and the culture was performed, and the endodermal leaf efficiency of the embryo was determined and the induction was performed. 3. Use of high-quality MSC induction and differentiation of iPS cells. As a result, the urine-derived cells were produced and the iPS cells were produced and the cells were induced and high-quality MSCs were produced.

项目成果

期刊论文数量（15）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

New stem cell therapy in dogs

狗的新干细胞疗法

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

末梢血単核球を用いた効率的なイヌiPS細胞の樹立および大量培養

利用外周血单核细胞高效建立和大量培养犬 iPS 细胞

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
木村和人;塚本雅也;吉田拓海;田中美有;桑村充;大高真奈美;西村健;中西真人;杉浦喜久弥;鳩谷晋吾
通讯作者：
鳩谷晋吾

CHEMICALLY-DEFINED AND FEEDER-FREE MAINTENANCE OF CANINE INDUCED PLURIPOTENT STEM CELLS

犬诱导多能干细胞的化学定义且无饲养层维持

DOI：
发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
0
作者：
S Hatoya;S Inoue;K Kimura;M Tsukamoto;M Ohtaka;K Nishimura;M Nakanishi;K Sugiura.
通讯作者：
K Sugiura.

Approaches to the Generation of Feline Induced Pluripotent Stem Cells Using Sendai Virus Vectors

使用仙台病毒载体产生猫诱导多能干细胞的方法

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
Shingo Hatoya;Shota Inoue;Kazuto Kimura;Masaya Tsukamoto;Manami Ohtaka;Ken Nishimura;Mahito Nakanishi;Kikuya Sugiura
通讯作者：
Kikuya Sugiura

Generation of Footprint‐Free Canine Induced Pluripotent Stem Cells from Peripheral Blood Mononuclear Cells Using Sendai Virus Vector

使用仙台病毒载体从外周血单核细胞生成无足迹犬诱导多能干细胞

DOI：
10.1002/mrd.23349
发表时间：
2020
期刊：
Molecular Reproduction and Development
影响因子：
2.5
作者：
Tsukamoto Masaya;Kimura Kazuto;Tanaka Miyuu;Kuwamura Mitsuru;Ohtaka Manami;Nakanishi Mahito;Sugiura Kikuya;Hatoya Shingo
通讯作者：
Hatoya Shingo