部位特異的遺伝子増幅機能を応用した放線菌二次代謝産物生産能力増強システムの構築
利用位点特异性基因扩增功能增强放线菌次生代谢产物生产能力的系统构建
基本信息
- 批准号:19K05779
- 负责人:
- 金额:$ 2.33万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
- 财政年份:2019
- 资助国家:日本
- 起止时间:2019-04-01 至 2022-03-31
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
放線菌Streptomyces avermitilisのゲノム縮小株(SUKA)における、S. kanamyceticusならびにStreptomyces sp. RM04株由来のZouAの部位特異的遺伝子増幅機能を応用した二次代謝産物生産能力増強システムを構築した。zouA_kanをRsB-attBs-RsA-zouA_kanの並びでカセット化し、線状プラスミドSAP1に導入した。chloramphenicol(Cml)生合成遺伝子を含むpCML2をSAP1上のattBサイトに導入した。pCML2の選択マーカーであるapramycin耐性遺伝子を利用し、培地中のapramycin濃度を段階的に低濃度から高濃度に添加量を増やし、高濃度のapramycinに対して耐性を示す株を液体培養によって集積した結果、Cmlクラスターが増幅して巨大化したと推測されるSAP1が観察された。増幅されたpCML2を含むSAP1の存在比は極めて低かったが、Cmlの生産量はzouA非導入株の2倍程度(0.4g/L)まで増加した。一方で、zouA_RM04の場合では、pCML2をSAP1ベクター上への導入のみで、効率良くcmlが増幅された。更に効率の良い遺伝子増幅効果を期待して、Cumateを誘導基質とした誘導型プロモーター(Pcmt:P21-cmt-CymRシステム)を用いた結果、cumate添加の有無にかかわらず、効率の良いpCML2の増幅が確認された。RM04株由来の野生型プロモーターを利用した当初の結果と比較しても顕著な増幅効果が見られたことから、今後はPcmtを利用することによって、効率の良い遺伝子増幅が期待できる。また、パルスフィールド電気泳動の結果、増幅された遺伝子領域は欠失することなく安定的に保持されており、観察できる限り、11コピーまで増幅されていた。
Streptomyces avermitilis (SUKA), S. kanamyceticus sp. RM04 was constructed to enhance the ability of secondary metabolite production by site-specific gene amplification of ZouA. zouA_kan RsB-attBs-RsA-zouA_kan Chloramphenol (Cml) was synthesized into a protein containing pCML2 and introduced into SAP1. The concentration of apramycin in pCML2 increased from low to high concentration, and the concentration of apramycin in pCML 2 increased from high to low concentration. The production of pCML2 and SAP1 increased by 2 times (0.4 g/L) compared with the non-introduced strain. In case of a party, zouA_RM04, pCML2 or SAP1, the import rate is good. In addition, we are looking forward to the effect of increasing the efficiency of the good gene, the results of using the Cumate-inducing matrix and the inducible modulator (Pcmt: P21-cmt-CymR system), the presence or absence of cumate addition, and the increase in the efficiency of pCML2 are confirmed. The wild type of RM04 strain was used for the first time, and the results were compared with those of the wild type strain. The results showed that the amplitude of the wild type strain was increased, and the amplitude of the wild type strain was increased. The results of electro-migration, amplitude increase and sub-domain loss are stable, stable and stable, and the amplitude increase is 11 degrees.
项目成果
期刊论文数量(4)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Modifications to central carbon metabolism in an engineered Streptomyces host to enhance secondary metabolite production
改造链霉菌宿主的中心碳代谢以增强次级代谢产物的产生
- DOI:10.1016/j.jbiosc.2020.08.006
- 发表时间:2020
- 期刊:
- 影响因子:2.8
- 作者:Doi Shiori;Komatsu Mamoru;Ikeda Haruo
- 通讯作者:Ikeda Haruo
In vitro Cas9-assisted editing of modular polyketide synthase genes to produce desired natural product derivatives
- DOI:10.1038/s41467-020-17769-2
- 发表时间:2020-08-11
- 期刊:
- 影响因子:16.6
- 作者:Kudo, Kei;Hashimoto, Takuya;Shin-ya, Kazuo
- 通讯作者:Shin-ya, Kazuo
An Unusual Extender Unit Is Incorporated into the Modular Polyketide Synthase of Scopranones Biosynthesis
- DOI:10.1021/acs.biochem.9b00908
- 发表时间:2019-12-17
- 期刊:
- 影响因子:2.9
- 作者:Demachi, Ayumu;Uchida, Ryuji;Ikeda, Haruo
- 通讯作者:Ikeda, Haruo
{{
item.title }}
{{ item.translation_title }}
- DOI:
{{ item.doi }} - 发表时间:
{{ item.publish_year }} - 期刊:
- 影响因子:{{ item.factor }}
- 作者:
{{ item.authors }} - 通讯作者:
{{ item.author }}
数据更新时间:{{ journalArticles.updateTime }}
{{ item.title }}
- 作者:
{{ item.author }}
数据更新时间:{{ monograph.updateTime }}
{{ item.title }}
- 作者:
{{ item.author }}
数据更新时间:{{ sciAawards.updateTime }}
{{ item.title }}
- 作者:
{{ item.author }}
数据更新时间:{{ conferencePapers.updateTime }}
{{ item.title }}
- 作者:
{{ item.author }}
数据更新时间:{{ patent.updateTime }}
小松 護其他文献
TG1 ファージインテグラーゼを用いたα プロテオバクテリアゲノム改変技術の開発
使用TG1噬菌体整合酶开发α变形菌基因组修饰技术
- DOI:
- 发表时间:
2011 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
森田健太郎;森村浩司;房田直記;小松 護;池田治生;平野 展孝;高橋 秀夫 - 通讯作者:
高橋 秀夫
Labdane 型ジテルペン合成酵素遺伝子のswapping による機能解析
Labdane型二萜合酶基因的交换功能分析
- DOI:
- 发表时间:
2013 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
山田 佑樹;西出 崇人;小松 護;池田 治生 - 通讯作者:
池田 治生
線状プラスミドを利用した二次代謝産物生合成遺伝子クラスター導入法
使用线性质粒的次级代谢物生物合成基因簇导入方法
- DOI:
- 发表时间:
2013 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
小松 護;小曽根 郁子;橋本 詢子;新家 一男;片岡 正和;池田 治生 - 通讯作者:
池田 治生
小松 護的其他文献
{{
item.title }}
{{ item.translation_title }}
- DOI:
{{ item.doi }} - 发表时间:
{{ item.publish_year }} - 期刊:
- 影响因子:{{ item.factor }}
- 作者:
{{ item.authors }} - 通讯作者:
{{ item.author }}
{{ truncateString('小松 護', 18)}}的其他基金
放線菌に高度に保存された多成分制御系conservonの機能と役割に関する研究
放线菌高度保守的多组分调控系统的功能和作用研究
- 批准号:
03J51011 - 财政年份:2003
- 资助金额:
$ 2.33万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
相似海外基金
特殊微生物と特殊培養法の融合による新規二次代謝産物の生産
结合特殊微生物和特殊培养方法生产新的次生代谢产物
- 批准号:
24K09865 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 2.33万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
針葉樹二次代謝産物の腐朽菌による生物変換機構の網羅的解析
腐烂真菌对针叶次生代谢产物生物转化机制的综合分析
- 批准号:
23K21222 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 2.33万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
アンフィジニウム属渦鞭毛藻の有用二次代謝産物の探索と開発
蛇鞭藻属有用的次生代谢产物的搜索和开发
- 批准号:
23K21364 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 2.33万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
樹幹損傷時に生成される樹脂中の非揮発性二次代謝産物の生成機構と機能解明
阐明树干受损过程中产生的树脂中非挥发性次生代谢产物的产生机制和功能
- 批准号:
24KJ0173 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 2.33万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
放線菌の持つ特異な窒素含有構造を持つ二次代謝産物生合成機構の解析
放线菌独特含氮结构次生代谢产物生物合成机制分析
- 批准号:
23K23459 - 财政年份:2024
- 资助金额:
$ 2.33万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
植物の有用二次代謝産物生産を活性化する分子技術の開発と展開
开发和部署分子技术以激活植物中有用的次生代谢物的产生
- 批准号:
22KJ0241 - 财政年份:2023
- 资助金额:
$ 2.33万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
イネにおける防御関連二次代謝産物の多様化
水稻防御相关次生代谢物的多样化
- 批准号:
22KJ2298 - 财政年份:2023
- 资助金额:
$ 2.33万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
真菌二次代謝産物Terreinが骨ホメオスタシスに及ぼす影響の免疫学的解析
真菌次生代谢产物Terrein对骨稳态影响的免疫学分析
- 批准号:
22K17036 - 财政年份:2022
- 资助金额:
$ 2.33万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
二次代謝産物の理解からひろがる植物を中心とした種間相互作用
以植物为中心的种间相互作用通过了解次生代谢物而扩展
- 批准号:
22K19350 - 财政年份:2022
- 资助金额:
$ 2.33万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
アンフィジニウム属渦鞭毛藻の有用二次代謝産物の探索と開発
蛇鞭藻属有用的次生代谢产物的搜索和开发
- 批准号:
21H02637 - 财政年份:2021
- 资助金额:
$ 2.33万 - 项目类别:
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)