放線菌に高度に保存された多成分制御系conservonの機能と役割に関する研究

放线菌高度保守的多组分调控系统的功能和作用研究

• 批准号: 03J51011
• 负责人: 小松 護
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03J51011/
• 关键词: conservon; Streptomyces; morphological differentiation; secondary metabolism; G protein; signal transduction; receptor; ATPase; Streptomyces griseus; Streptomyces coelicolor; histidine kinase; GTP; GDP結合蛋白質; 相互作用; two-hybrid system

conservonは4-5個の遺伝子よりなるオペロンであり、Streptomyces coelicolor A3(2)の染色体上には相同性の高い13セット存在している。その内のcvn9の構成遺伝子cvnA9-E9がコードする5種の蛋白(A9-E9)を、それぞれ大腸菌を宿主として発現調製し、その性質を詳細に解析した。A9は少なくともホモ4量体を形成し、ATP特異的結合能とATPase活性を有していたが、自己リン酸化能は有していなかった。B9はホモ4量体を形成した。D9はGTP/GDP特異的結合能とGTPase活性を有することを確認した。E9は典型的なP450に特徴的な吸収スペクトルを示し、S.coelicolor A3(2)が染色体上にコードするP450還元酵素である、3つのフェレドキシンレダクターゼ(FR1-3)と6つのフェレドキシン(f1-6)のうち、FR1/f2さらに、蛋白間の試験管内相互作用解析により、E9は他のどれとも相互作用しなかったが、A9はADP結合型の時にB-D9と相互作用し、ATP結合型で解離することが示された。D9はGDP結合型の時にABCと相互作用したが、GTP結合型で解離することが示された。これらの知見はA-D9が複合体を形成することを示唆し、それはこれらを大腸菌内で共発現させた実験でも確認された。このような複合体形成の様式と構成因子の機能は、真核生物に普遍的なG蛋白共役型レセプターと類似しており、Cvn9複合体においてもATPおよびGTPの加水分解にともなって複合体が解離し、解離したD9がGTP結合型でシグナル伝達の分子スイッチとして機能するものと考えられた。また、ビオチン標識したcvn9プロモーターを用いたDNAアフィニティー精製により、当オペロンの転写制御を行うと予想される転写制御蛋白質BldDとLexAの同定に成功した。

conserver has 4-5 chromosomes, Streptomyces coelicolor A3(2) has 13 chromosomes with high homology. The five proteins (A9-E9) that comprise cvn9 in the genome, including E. coli, are analyzed in detail for their properties. A9 has a small amount of ATP binding energy and ATPase activity, and a small amount of ATP binding energy. B9 is a volume. D9/GDP binding activity E9 is a typical P450-specific enzyme, S.coelicolor A3(2) is a P450-specific enzyme, FR1 - 3 is a P450-specific enzyme, FR1/f2 is a P450-specific enzyme, E9 is a P450-specific enzyme, FR1 -3 is a P450-specific enzyme, FR1/f2 is a P450-specific enzyme, FR1 -6 is a P450-specific enzyme, FR1/f2 is a P450-specific enzyme, and E9 is a P450-specific enzyme. A9 is shown to dissociate from ADP bound B-D9 and ATP bound B-D9. D9 is a GDP-bound, time-dependent ABC interaction, and a GTP-bound dissociation. The A-D9 complex was found in E. coli. The function of the constitutive factors of the complex formation is similar to that of the common G protein co-service type in eukaryotes. The complex of Cvn9 is dissociated from ATP and GTP by hydrolysis. The complex of Cvn9 is dissociated from D9 by GTP. The identification of DNA and the identification of BldD and LexA are successful in purification and control of DNA and LexA.