GH30 β-1,6-グルコシダーゼの構造機能解析と有用糖質合成への応用

GH30 β-1,6-葡萄糖苷酶的结构和功能分析及其在有用碳水化合物合成中的应用

• 批准号: 19K05826
• 负责人: 磯野 直人
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K05826/
• 关键词: GH30; β-グルコシダーゼ; グライコシンターゼ; ゲンチオビオース; β-1,6-グルコシダーゼ

Caldicellulosiruptor bescii由来β-1,6-グルコシダーゼ(CbGH30_1)の結晶化条件の最適化を行った。また、同条件において、本酵素の生成物であるグルコースとの複合体の結晶化も行った。X線回折装置を用いて各結晶からの回折強度データを測定した。すでに明らかにされているSalmonella typhimurium由来GH30タンパク質SrfJの構造をモデルとした分子置換法により位相決定を行い、分解能約2オングストロームで構造を決定した。CbGH30_1は他のGH30酵素と同様にTIMバレル構造を持つことが明らかとなった。酵素-生成物複合体において、グルコースはサブサイト-1の位置に結合していると予想された。ラミナリビオース、α-グルコシルフルオリド、α-グルコース 1-リン酸を基質として、HhGH30Aのグライコシンターゼと、Ochromonas danica由来β-1,3-グルカンホスホリラーゼ（β-1,3-グルカン伸長酵素）の反応を同時に行った。その結果、直鎖β-1,3-グルカンの沈殿（α-グルコース 1-リン酸を基質としたβ-1,3-グルカンホスホリラーゼのみの反応で生じる）は生じず、水溶性の多糖が合成された。生成した多糖をエタノール沈澱で回収し、メチル化分析により構造を解析した。その結果、水溶性多糖はβ-1,6-グルコシド結合による分岐を有するβ-1,3-グルカン（β-1,3-1,6-グルカン）であることが明らかとなった。また、この水溶性多糖のグルコース重合度をサイズ排除HPLCで分析したところ、数平均重合度が35、重量平均重合度が56と計算された。

The origin of Caldicellulosiruptor bescii is β-1. 6. The crystallization condition of CbGH30_1 is the most effective one. Under the same conditions, the compound of this enzyme product was crystallized. The X-ray folding device is used to determine the strength of the X-ray folding device. This is due to the origin of Salmonella typhimurium, GH30, SrfJ, molecular placement, phase determination, decomposition energy, and decomposition energy. The GH30 enzyme of CbGH30_1 is the same as that of TIM. The enzyme-product complex, the enzyme-product complex, the enzyme-1 position, the enzyme-product complex, the enzyme-product, the position, the position. The expression of β-lactamase, alpha-phenylethylamine, alpha-thiazolyl acid, HhGH30A and Ochromonas danica was analyzed in the same time. The results of the experiment, the synthesis of water-soluble polysaccharides and the synthesis of α-amino acid-soluble polysaccharides. The production of polysaccharides, chemical analysis, chemical analysis, chemical analysis and chemical analysis. The results showed that the combination of water-soluble polysaccharides (β-1) and water-soluble polysaccharides (β-1) (β-1) (β-1) and β-1 (β-1) were found. The average coincidence degree of water-soluble polysaccharides was 35, the average coincidence degree of weight was 56, and the average coincidence degree of number and weight were 35 and 56, respectively. The coincidence degree of water-soluble polysaccharides was excluded from HPLC analysis.

项目成果

ゲノム情報を活用した有用糖質の合成

利用基因组信息合成有用的碳水化合物

• 发表时间: 2019
• 作者: Komatsu Nao;Ishino Yuko;Shirai Rina;Sakata Ken-taro;Tani Motohiro;Maeda Tatsuya;Tanaka Naotaka;Tabuchi Mitsuaki;磯野直人
• 通讯作者: 磯野直人

Halobacillus halophilus由来GH30_1酵素のグライコシンターゼ化

嗜盐芽孢杆菌 GH30_1 酶的糖合酶转化

• 发表时间: 2021
• 作者: 谷柚希;増村 威宏;森田 重人;安田愛梨，三宅英雄，勝崎裕隆，梅川碧里，磯野直人
• 通讯作者: 安田愛梨，三宅英雄，勝崎裕隆，梅川碧里，磯野直人

好熱菌由来β-グルコシダーゼ/キシロシダーゼの機能解析

嗜热菌β-葡萄糖苷酶/木糖苷酶的功能分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 中井夏穂;小川恵莉;石川涼一;柳原和典;高木宏基;磯野直人
• 通讯作者: 磯野直人

Caldicellulosiruptor bescii由来 GH30酵素の機能解析

贝斯热纤维素酶 GH30 的功能分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 中井夏穂;小川恵莉;石川涼一;柳原和典;高木宏基;磯野直人
• 通讯作者: 磯野直人