環境指標生物オオミジンコに対する内分泌撹乱物質の簡易スクリーニング系の開発

开发环境指示生物大型溞内分泌干扰物的简单筛选系统

• 批准号: 19K06092
• 负责人: 原島 小夜子
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Osaka Metropolitan University (2022)Osaka Prefecture University (2019-2021)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K06092/
• 关键词: オオミジンコ; 内分泌撹乱物質; 酵母レポーターアッセイ法; 脱皮ホルモン; 幼若ホルモン; 酵母レポーターアッセイ; 環境指標生物

オオミジンコは化学物質に対する感受性が高く、化学物質の内分泌撹乱性・毒性の指標として繁殖試験(脱皮回数、産仔数、仔虫の性比)が採用されている。この手法は化学物質の個体への影響を直接的に判別する手法であるが、非常に煩雑で熟練の技術が必要であり、供試のためのオオミジンコの前培養期間を含めると、3週間から1ヶ月程度と長い時間を要する。また、実施可能な研究機関が限定されているのが現状である。本研究ではオオミジンコに対する内分泌撹乱物質の標的であり、繁殖に重要な脱皮ホルモン受容体(EcR-USP)および幼若ホルモン受容体(Met)を発現する遺伝子組換え酵母を作製し、環境試料中のそれぞれの受容体のリガンド物質を簡便・迅速(2 日)・安価に検出できるレポーターアッセイ系を創出した。また、これらの酵母株を実際にため池の水などの環境試料のアッセイに用い、酵母レポーターアッセイでリガンド物質の検出が可能であることを示した。今年度は、昨年度に新たに同定したオオミジンコ生体内でのMetの新規応答配列２種について、　Metの結合配列E-box (CACGTG)への変異導入や、E-boxを含む配列の長さを変化させることにより、それらの特性について詳細な解析を試みた。また、当初の計画にはなかったものの、昨年度から着手したUSP発現酵母株の作製に関しても、様々な化学物質のアッセイを行い、これまで知られていなかったUSPのアゴニスト・アンタゴニストを同定した。

High sensitivity to chemical substances, endocrine disturbance of chemical substances, toxicity indicators and reproductive tests (number of molting, litter size, sex ratio of larvae) were adopted. The method is to determine the individual effects of the chemical substance directly. The method is very complicated. The skilled technique is necessary. The pre-incubation period of the test is 3 weeks. The pre-incubation period is 1 month. The research organization is limited to the status quo. In this study, the target of endocrine disrupting substances in the environment was identified, and the development of the receptor (EcR-USP) and young receptor (Met) was studied. The sub-components of yeast were replaced, and the receptor substances in environmental samples were identified simply, rapidly (2 days), and safely. The yeast strain is used in the production of water and environmental samples. This year, the new regulations of Met in vivo were introduced into the E-box (CACGTG), and the characteristics of Met in vivo were analyzed in detail. The original plan was to develop a yeast strain that was related to the production of chemical substances and the determination of USP.

项目成果

Establishment of yeast-based reporter gene assay for juvenile hormone receptor using novel juvenile hormone response element of Daphnia magna

利用大型溞的新型保幼激素反应元件建立基于酵母的保幼激素受体报告基因检测

• 发表时间: 2020
• 作者: Masahiro Ogawa;Sayoko Ito-Harashima;Kenta Kitazumi;Takahiro Kyoya;Megumi Terada;Masanobu Kawanishi;Takashi Yagi
• 通讯作者: Takashi Yagi

オオミジンコ幼若ホルモン受容体発現酵母株を用いたレポーターアッセイ法による新規応答配列の探索

使用表达大型溞保幼激素受体的酵母菌株通过报告基因测定寻找新的反应元件

• 发表时间: 2021
• 作者: 原島小夜子;小川真弘;京谷恭弘;寺田めぐみ;川西優喜;八木孝司
• 通讯作者: 八木孝司

酵母レポーターアッセイ法によるオオミジンコVrille遺伝子上流のE-box/E-box様配列を介した幼若ホルモン受容体リガンド物質の検出

使用酵母报告基因测定法通过大型溞基因上游的E-box/E-box样序列检测保幼激素受体配体物质

• 发表时间: 2020
• 作者: 原島小夜子;小川真弘;川西優喜;八木孝司
• 通讯作者: 八木孝司

Establishment of yeast-based reporter gene assay systems to detect ligands of molting and juvenile hormone receptors of various insects

建立基于酵母的报告基因检测系统，检测各种昆虫蜕皮和保幼激素受体的配体

• 发表时间: 2021
• 作者: Sayoko Ito-Harashima;Yoshiaki Nakagawa;Takashi Yagi
• 通讯作者: Takashi Yagi

オオミジンコ幼若ホルモン受容体発現レポーターアッセイ酵母株を用いた幼若ホルモン様物質の検出

Daphnia magna 保幼激素受体表达报告基因测定 使用酵母菌株检测保幼激素样物质

• 发表时间: 2020
• 作者: 小川真弘;原島小夜子;北住健太;京谷恭弘;寺田めぐみ;川西優喜;八木孝司
• 通讯作者: 八木孝司