血友病発症犬におけるフコイダンの血小板及び凝固活性化を介した出血抑制機序の解明

阐明岩藻依聚糖通过血小板和凝血激活对血友病犬的出血抑制机制

基本信息

批准号：
19K06381
负责人：
鬼頭克也
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Gifu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の主目的は，1）フコイダンによる血小板活性化機序の解明，2）活性化血小板による組織因子経路インヒビター阻害と血液凝固能亢進の証明，3）犬に経口投与したフコイダンの吸収動態と血小板活性化の検証である。これまでに，1）組成（抽出法，硫酸化度）の異なるフコイダンでは，犬の血小板を活性化する強度（分子量及び濃度依存性）とその作用機序（チロシンキナーゼ依存性経路，G蛋白共役受容体を介した経路）が異なることを示した。また，2）フコイダンはTFPI（組織因子経路阻害因子）の阻害により凝固能を亢進（トロンビン産生の亢進による出血を抑制）すること，フコイダン刺激により活性化した血小板は，表面にホスファチジルセリンが発現して凝固反応の足場を形成するとともに血小板由来マイクロパーティクルを放出することで血小板周囲の凝固促進活性を高めること，を示唆する成績を得た。今回は　1）について，犬の血小板膜上にあるフコイダン受容体を同定するために，コラーゲン受容体GPVIアンタゴニスト（Losartan及びTriplatin）をそれぞれ前処理して凝集態度の変化を観察した。しかし，いずれも再現性のある有意な結果を得ることができず，受容体を同定するに至っていない。3）について，健康なビーグル3頭を対象にフコイダン（分子量30万）を28日間経口投与（40mg/kg/day）し，血小板凝集能を全血インピーダンス法で測定した。凝集能は5種類の濃度のADP及びCollagenにより，凝集閾値濃度を求めて評価した。また，血液中のフコイダン濃度をオキナワモズク由来フコイダンに対する特異的抗体を用いたサンドイッチELISA法により測定した。その結果，投与後の血小板機能と血中濃度に有意な関係は認められなかった。フコイダン投与後の止血機能評価は血小板機能検査では不適で，これを包括的に評価する方法（TEG）が必要である。

这项研究的主要目的是1）阐明富谷烷的血小板激活机制，2）证明组织因子途径抑制抑制和通过活化血小板的抑制作用，以及3）验证吸收动力学和血小板对狗的葡萄糖剂的血小板活化。迄今为止，1）具有不同组成的岩藻素（提取方法，硫酸程度）表明，激活狗中血小板的强度（分子量和浓度依赖性）及其作用机制（酪氨酸激酶依赖性途径，通过G蛋白耦合受体途径）有所不同。 Furthermore, 2) fucoidan enhances coagulation ability (suppresses bleeding due to increased thrombin production) by inhibiting TFPI (tissue factor pathway inhibitor), and platelets activated by fucoidan stimulation can express phosphatidylserine on their surfaces to form a scaffold for coagulation reactions and release platelet-derived microparticles, thereby increasing the procoagulation activity around血小板。在本文中，在1）中，我们通过预处理胶原蛋白受体GPVI拮抗剂（Losartan和triplatin）来观察到聚集态度的变化，以鉴定狗的血小板膜上的葡萄干受体。但是，尚未获得这些结果可再现且显着的结果，也没有鉴定出受体。 3）：在三个健康的小蛋黄中口服（40 mg/kg/day）的fucoidan（分子量：300,000）持续28天，并使用全血阻抗方法测量了血小板聚集能力。通过使用五个不同浓度的ADP和胶原蛋白来确定聚集阈值浓度来评估聚集能力。此外，使用源自源自冲绳的莫祖库的岩藻依藻酸酯的特异性抗体，通过三明治ELISA测量血液中的岩藻烷浓度。结果，给药后没有观察到血小板功能与血液浓度之间的显着关系。岩藻依氨酸施用后的止血功能评估不适用于血小板功能测试，对此（TEG）进行了全面评估。