血友病発症犬におけるフコイダンの血小板及び凝固活性化を介した出血抑制機序の解明

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本研究の主目的は，1）フコイダンによる血小板活性化機序の解明，2）活性化血小板による組織因子経路インヒビター阻害と血液凝固能亢進の証明，3）犬に経口投与したフコイダンの吸収動態と血小板活性化の検証である。これまでに，1）組成（抽出法，硫酸化度）の異なるフコイダンでは，犬の血小板を活性化する強度（分子量及び濃度依存性）とその作用機序（チロシンキナーゼ依存性経路，G蛋白共役受容体を介した経路）が異なることを示した。また，2）フコイダンはTFPI（組織因子経路阻害因子）の阻害により凝固能を亢進（トロンビン産生の亢進による出血を抑制）すること，フコイダン刺激により活性化した血小板は，表面にホスファチジルセリンが発現して凝固反応の足場を形成するとともに血小板由来マイクロパーティクルを放出することで血小板周囲の凝固促進活性を高めること，を示唆する成績を得た。今回は　1）について，犬の血小板膜上にあるフコイダン受容体を同定するために，コラーゲン受容体GPVIアンタゴニスト（Losartan及びTriplatin）をそれぞれ前処理して凝集態度の変化を観察した。しかし，いずれも再現性のある有意な結果を得ることができず，受容体を同定するに至っていない。3）について，健康なビーグル3頭を対象にフコイダン（分子量30万）を28日間経口投与（40mg/kg/day）し，血小板凝集能を全血インピーダンス法で測定した。凝集能は5種類の濃度のADP及びCollagenにより，凝集閾値濃度を求めて評価した。また，血液中のフコイダン濃度をオキナワモズク由来フコイダンに対する特異的抗体を用いたサンドイッチELISA法により測定した。その結果，投与後の血小板機能と血中濃度に有意な関係は認められなかった。フコイダン投与後の止血機能評価は血小板機能検査では不適で，これを包括的に評価する方法（TEG）が必要である。