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世代を通した導入遺伝子の発現安定化を目指したDNAメチル化の人為的制御法の確立

建立DNA甲基化人工控制方法，旨在稳定导入基因的世代表达

基本信息

批准号：
19K06460
负责人：
山本耕裕
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Osaka Medical and Pharmaceutical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K06460/
关键词：
DNAメチル化遺伝子サイレンシング Dnmt サイレンシング transgenerational メチル化

项目摘要

本研究では世代を越えると導入遺伝子の発現が抑制される“導入遺伝子サイレンシング”を回避する方法の確立を目指す。これら遺伝子サイレンシングの実体は導入遺伝子プロモーターの高DNAメチル化に起因すると考えられているため、導入遺伝子のサイレンシグにおけるDNAメチル化の関係を明らかにすることを目的とする。哺乳類では初期発生と生殖細胞形成過程において大規模なDNAメチル化の変動が起こることが報告されているが、メダカ配偶子形成におけるDNAメチル化の動体は未だ明らかでは無い。研究目的の達成のため、これまでにメダカ配偶子形成におけるDNAメチル化状態を明らかにした。具体的にはメダカ雌雄配偶子形成過程と初期発生におけるDNAメチル化パターンの変動をDNAメチル化の特異的である5メチルシトシン抗体を用いた免疫組織的手法と次世代シークエンサーによるDNAメチル化状態の網羅的解析から解析した。メダカ配偶子形成におけるDNAメチル化の機能を解析するため、DNAメチル化の修飾酵素であるDnmtファミリー遺伝子のノックアウト個体をCRISPR-Cas9システムにより作出した。メダカでは３種類のDnmt3遺伝子(Dnmt3a, Dnmt3b-1, Dnmt3b-2)が同定されており、これらすべてのノックアウト個体を作出した。今年度は3種類のDnmt3のうち2種や全てをノックアウトしたトリプルノックアウト個体のライン化並びに表現型解析を行った。

This study aims to establish a method to prevent the occurrence of transgendered vectors. The results show that the gene expression of the gene is related to the DNA structure of the gene. Mammalian early development and germ cell formation process, large-scale DNA transformation of the movement, the report, the formation of a mate, DNA transformation of the movement is not clear, there is no The purpose of this study is to clarify the state of DNA hybridization in the formation of mating offspring. The specific analysis of the process of male and female mate formation, the initial development, the change of DNA culture, the specific use of antibodies, the analysis of DNA culture status, the analysis of the next generation The function analysis of DNA sequencing in the formation of CRISPR-Cas9 system is carried out by Dnmt gene promoter and CRISPR-Cas9 system modification enzyme. Dnmt3 genes (Dnmt3a, Dnmt3b-1, Dnmt3b-2) of three species were identified as the same species. This year there are 3 kinds of Dnmt3 kinds of Dnmt3 kinds of Dnmt