自然免疫受容体に対するアゴニスト抗体のワクチンアジュバントへの応用

天然免疫受体激动性抗体作为疫苗佐剂的应用

基本信息

批准号：
19K07491
负责人：
山崎達也
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Aichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

TLRファミリー分子のRadioprotective 105(RP105)に対するアゴニスト抗体(RP/14,ラットハイブリドーマ由来)は強力なB細胞活性化能がある。タンパク抗原とともにRP/14をマウスへ接種することで、抗原特異抗体レベルの増強効果(アジュバント効果)が示されている(Chaplin J W et al J Exp Med）。本研究では、RP/14を発現する「抗体遺伝子」を、遺伝子免疫におけるアジュバントへ応用することを目指している。タンパク抗体に比べ抗体遺伝子の精製コストは低く、また遺伝子工学技術で容易にその抗体構造を変えられるという利点がある。これまでの成果として、膜貫通ドメイン遺伝子を付加したRP/14抗体遺伝子（膜型RP/14）とインフルエンザウイルス抗原遺伝子をマウスに同時に投与すると、抗原特異的抗体レベルは有意に上昇することを報告した(Yamazaki T et al Front Immunol 2020)。昨年度では、RP/14抗体遺伝子の最適化を検討した。マウスにおける抗原性を低くするため、用いた膜型RP/14は、可変領域以外の定常領域（C）遺伝子をマウス遺伝子に置き換えていた（キメラ膜型RP/14)。しかし、キメラRP/14のB細胞活性化能は、オリジナルのRP/14に比べかなり低下していたので、定常領域の一部(CH1)をラット遺伝子に復帰させたところ、そのB細胞活性化能は著しく上昇した。昨年度のこの知見をもとに、キメラ膜型RP/14の遺伝子構造を修正し、ウイルス抗原とともにマウスに投与したが、高いレベルのアジュバント効果は得られなかった。Chaplinらは、RP/14と抗原の共有結合がそのアジュバント効果に必須であるとしている。そこで、膜型RP/14とウイルス抗原の融合遺伝子を作製し、B細胞活性化能を評価した。

针对TLR家族分子辐射保护105（RP105）的激动剂抗体（RP/14，源自大鼠杂交瘤）具有强B细胞活化潜力。用RP/14和蛋白质抗原接种小鼠已经显示出抗原特异性抗体水平的增强作用（辅助作用）（Chaplin J W等人J Exp Med）。这项研究的目的是将“抗体基因”应用于基因免疫中的辅助剂表达RP/14。与蛋白质抗体相比，抗体基因的纯化成本较低，优势在于，抗体结构可以使用基因工程技术轻松改变。结果，我们报道说，当小鼠同时施用带有跨膜结构域基因（膜RP/14）和流感病毒抗原基因的RP/14抗体基因时，抗原特异性抗体水平显着增加（Yamazaki T等人前Immunol 2020）。去年，我们考虑了优化RP/14抗体基因。为了降低小鼠的抗原性，使用小鼠基因（嵌合膜型RP/14），使用的膜型RP/14取代了恒定区域（C）基因。但是，由于与原始RP/14相比，嵌合RP/14激活B细胞的能力显着降低，当将恒定区域的一部分（CH1）恢复为大鼠基因时，其激活B细胞的能力显着提高。基于去年的这一发现，对嵌合膜RP/14的遗传结构进行了修饰，并与病毒抗原一起对小鼠施用，但没有获得高水平的辅助作用。卓别林等。指出RP/14和抗原的共价结合对于其佐剂作用至关重要。因此，产生了膜型RP/14与病毒抗原之间的融合基因，并评估了其B细胞活化能力。