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Development of evaluation system for frozen and aged oocytes / ova using membrane potential measurement

使用膜电位测量开发冷冻和老化卵母细胞/卵子的评估系统

基本信息

批准号：
19K09807
负责人：
三宅将生
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Fukushima Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K09807/
关键词：
膜電位卵細胞胚生殖医療体外受精胚盤胞体外授精

项目摘要

今年度もマウスから卵を採取し、媒精後、その発生過程における胚の電位測定を実施して、電位測定の特性とゼロ電位胚の特徴を検索した。卵への電極刺入時には、まず針先が透明帯を貫通する必要がある。胚の電位測定においては、この透明帯貫通時に一旦マイナスの電位を示し、その後深く刺入したのちにはプラスを示すという二相性が見られる。この現象は、採卵時のマウスの週齢が4週齢でも9週齢でも、同様に観察されている。しかし、ゼロに近い電位を示す胚や透明帯除去胚ではあまり観察されない。本年はこうした現象と凍結融解操作との間の関係性の有無について検討した。その結果、凍結融解胚、新鮮胚ともに、透明帯除去によって二相性の電位が消失していることが確認された。すなわち、凍結融解操作の有無にかかわらず、透明帯の電位測定に対する影響が示唆された。未受精卵でも同様に、凍結融解操作の有無によらず、透明帯除去による二相性電位の消失が観察された。なお、EDTAやEGTAなどキレート剤の添加や、顆粒膜細胞除去時および透明帯消化時の酵素処理条件（酵素濃度および細胞外液のイオン組成）はこうした結果に影響を与えなかった。一方で、電位測定後に振り分けた胚の発現パターン解析などの分子生物学的実験を予定していたが、胚数を増やして実験を行う必要が生じたため、これは次年度に先送りすることとした。これら上記の内容の一部は、主に日本生理学会第100回記念大会において発表された。

This year, the potential measurement of the embryo is carried out after the embryo is taken, the embryo is refined, and the characteristics of the embryo are detected When the electrode is inserted into the egg, it is necessary for the needle to be transparent. When the potential of the embryo is measured, the transparent band is penetrated, and the potential of the embryo is displayed. After the penetration, the two-phase property is displayed. This phenomenon occurs when eggs are collected, and when they are collected, they are collected every 4 weeks, and when they are collected, they are collected every 9 weeks. In addition to the above, the near potential of the transparent band can be detected. This year, the relationship between the phenomenon and the freezing and melting operation is discussed. The results, frozen and melted embryos, fresh embryos, transparent band removal, two-phase potential disappearance, and confirmation The influence of the freezing and thawing operation on the determination of the potential of the transparent band is shown. The presence or absence of the freezing and thawing operation of the unfertilized egg, the disappearance of the biphasic potential due to the removal of the transparent zone, etc. are observed. The enzyme treatment conditions (enzyme concentration and extracellular fluid composition) during granular membrane cell removal and transparent digestion affect the results. The molecular biology of a plant is determined by the number of organisms detected after the potential measurement. The 100th Memorial Meeting of the Japanese Physiological Society was held in Beijing.