Development of evaluation system for frozen and aged oocytes / ova using membrane potential measurement

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今年度もマウスから卵を採取し、媒精後、その発生過程における胚の電位測定を実施して、電位測定の特性とゼロ電位胚の特徴を検索した。卵への電極刺入時には、まず針先が透明帯を貫通する必要がある。胚の電位測定においては、この透明帯貫通時に一旦マイナスの電位を示し、その後深く刺入したのちにはプラスを示すという二相性が見られる。この現象は、採卵時のマウスの週齢が4週齢でも9週齢でも、同様に観察されている。しかし、ゼロに近い電位を示す胚や透明帯除去胚ではあまり観察されない。本年はこうした現象と凍結融解操作との間の関係性の有無について検討した。その結果、凍結融解胚、新鮮胚ともに、透明帯除去によって二相性の電位が消失していることが確認された。すなわち、凍結融解操作の有無にかかわらず、透明帯の電位測定に対する影響が示唆された。未受精卵でも同様に、凍結融解操作の有無によらず、透明帯除去による二相性電位の消失が観察された。なお、EDTAやEGTAなどキレート剤の添加や、顆粒膜細胞除去時および透明帯消化時の酵素処理条件（酵素濃度および細胞外液のイオン組成）はこうした結果に影響を与えなかった。一方で、電位測定後に振り分けた胚の発現パターン解析などの分子生物学的実験を予定していたが、胚数を増やして実験を行う必要が生じたため、これは次年度に先送りすることとした。これら上記の内容の一部は、主に日本生理学会第100回記念大会において発表された。