ゲノムマイニングによる真菌類由来のサイレントな新奇バイオマス高分解酵素の探索

通过基因组挖掘寻找源自真菌的新型沉默生物质降解酶

基本信息

批准号：
18K05383
负责人：
渡部昭
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-04-01 至 2022-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は、昨年度に引き続き麹菌ゲノム上に存在するGlycoside hydrolase family(GH)タンパク質群のうち、これまで未解析であった麹菌β-グルコシダーゼのうち、新たにBglB、E、G、I、L、M、Xの麹菌を宿主とした高発現株を取得した。このうち、β-グルコシダーゼの基質である4ーメチルウンベリフェリル-β-D-グルコピラノシドを含んだプレートアッセイで最も大きなクリアゾーンを形成したBgl Iについて、酵素を精製しその諸性質を解析した。本酵素は、硫安塩析、2種類の陰イオン交換クロマトグラフィー（Super Q 650M、DEAE FF）によって精製した。精製酵素を用いた解析から、本Bgl Iは55℃、30分処理で残存活性を100％保持しており、かなり温度に対して安定性の高い酵素であることが判明した。基質特異性については、天然オリゴ糖基質のうちラミナリン、ソホロース、ラミナリビオース、セロビオース、ゲンチオビオース、ラクトース、マルトース、アルブチン、サリシンといったα、β結合やアリル配糖体について反応させたが、いずれの基質に対しても活性を示さなかった。一方、β-グルコシダーゼの合成基質(pNP(p-ニトロフェニル)基質)に対しては、pNP-グルコース、pNP-フコース、pNP-ラクトース、pNP-ガラクトース、pNP-キシロース、pNP-セロビオシドについて反応させたところ、pNP-グルコースのみに活性を示す極めて基質特異性の高い酵素であることが判明した。一方、エンドグルカナーゼについては、従来未解析のEglG、N、O、Pの麹菌を宿主とした高発現株を作製し。このうち発現タンパク質量が最も多かったEglNについて、硫安塩析、陰イオン交換クロマトグラフィーを用いて精製を試みている。

今年，我们在以前未分析的糖苷水解酶家族（GH）蛋白基因组中，在Koji霉菌基因组中，在Koji Mold基因组中，在上一个财政年度中，我们获得了以前未分析的糖苷水解酶家族（GH）蛋白基团的新近表达的菌株。其中，将酶纯化，BGL I的性质，该酶在含有4-甲基固体的板测定中形成了最大的透明区域，该区域含有4-甲基固体 - β-β-β-D-葡萄糖苷，β-葡萄糖苷酶的底物。通过硫酸铵腌制和两种类型的阴离子交换色谱法（Super Q 650m，DEAE FF）纯化该酶。使用纯化酶的分析表明，该BGL在55°C治疗30分钟后保留了100％的残留活性，并且是一种高度稳定性的高度稳定酶。关于底物特异性，在天然的寡糖底物中，α，β键和烯丙基糖苷（例如椎板，柔胶，柔毛，拉米那烷酸，纤维二糖，糖果，乳糖，乳糖，麦芽糖，麦芽糖，芳丁蛋白和盐蛋白）都没有反应任何活性，但没有任何活性。另一方面，当将β-葡萄糖苷酶（PNP（p-硝基苯基）底物的合成底物与PNP-葡萄糖，PNP-糖果，PNP-乳糖，PNP-乳糖，PNP-乳糖糖，PNP- Xylose，PNP- Xylose，PNP-Cylobioside仅与Enzyme的活性相关，是在高度高度的，PNP-葡萄糖，PNP-乳糖，PNP-乳糖糖，PNP-乳糖糖，PNP-乳糖糖，PNP-乳糖，PNP-乳糖，PNP-乳糖，PNP-乳糖，PNP-乳糖，PNP-乳糖，PNP-乳糖，PNP-乳糖，PNP-乳糖，PNP-乳糖糖，高度高度，是在高度的上PNP-葡萄糖。另一方面，对于内生葡萄糖酶，使用EGLG，N，O和P的先前未分析的Koji模具作为宿主产生高度表达的菌株。其中，使用硫酸铵腌制和阴离子交换色谱法纯化了最高量的表达蛋白的EGLN。