生体認識配糖体生産のための特異的糖鎖遊離酵素の構造解析とその機能開発

用于生物识别糖苷生产的特定糖链释放酶的结构分析和功能开发

基本信息

项目摘要

2020年度から2021年度の研究において、エンド-β-N-アセチルグルコサミニダーゼPM(エンドPM)の3つのアイソザイムのうち、エンドPMαの結晶を用いて、つくば高エネルギー加速器研究機構においてX線結晶回析測定を行い、立体構造を明らかにした。そして、エンドPMαは5つの異なるドメインI~Vから構成されていることを明らかにし、それぞれの特徴を解析した。2022年度は、エンドPMαの結晶状態の立体構造と溶液中の構造の差異を検証するため、低角X線散乱法(SAXS法)によって溶液中のエンドHSの立体構造を解析した。つくば高エネルギー加速器研究機構において、ゲルろ過クロマトグラフィーカラムを用いたSAXS法(SEC-SAXS)によって、以下の条件で測定を行った。測定条件:Light source, PF BL-10C; Detector, PILATUS3 2M; Wavelength, 1.0オングストローム; Exposure time, 20 sec/image; Camera length (Vacuum chamber), 2 m; Buffer solution,10 mM Na, K-PB pH 6.5。得られた散乱曲線のデータをもとに溶液中のエンドPMαの立体構造を構築したところ、エンドPMαのRgは 33.5 +/- 1.1 オングストローム、RMAX値は129オングストロームとなった。また、ダミー分子で立体構築したところ、極めて非対称性の高い構造をとることが明らかとなった。さらに、得られた実験散乱曲線と結晶構造から計算される理論曲線とを比較したところ、両曲線の違いを示すχ2 値が1.28となり、大きく異なっていた。このためエンドPMαの立体構造は結晶状態と溶液状態ではことなっていることが示唆された。
In 2020 and 2021, the research was carried out in the middle of the year, and the three-dimensional structure of PM (PM) was revealed. Analysis of the characteristics of the five different types of PMα and I~V In 2022, we will test the difference between the three-dimensional structure of ENDED PMα in its crystalline state and the structure in solution, and analyze the three-dimensional structure of ENDED HS in solution using the low-angle X-ray scattering method (SAXS method). The SAXS method (SEC-SAXS) was used to determine the temperature and the following conditions. Measurement conditions: Light source, PF BL-10C; Detector, PILATUS3 2M; Wavelength, 1.0オングストローム; Exposure time, 20 sec/image; Camera length (Vacuum chamber), 2 m; Buffer solution,10 mM Na, K-PB pH 6.5。The three-dimensional structure of PM α in solution was constructed by using Rg of PM α 33.5 +/-1.1 ° and RMAX 129 °. The structure of the molecule is three-dimensional, and the structure of the pole is asymmetrical. The theoretical curves obtained from the calculation of crystal structure are compared with the theoretical curves obtained from the calculation of crystal structure. The three-dimensional structure of PMα is in crystalline state and solution state.

项目成果

期刊论文数量(33)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Preparation, characterization and release study of astaxanthin encapsulated-levan nanoparticles
虾青素包封果聚糖纳米粒子的制备、表征及释放研究
  • DOI:
  • 发表时间:
    2018
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Kamontip Kuttiyawong;Santhana Nakapong;Kuakarun Krusong;Jarunee Kaulpiboon;Prakarn Rudeekulthamrong;Shuichiro Murakami;Kazuo Ito and Piamsook Pongsawasdi,
  • 通讯作者:
    Kazuo Ito and Piamsook Pongsawasdi,
Prevotella melaninogenica(99.0)の産生するエンド-β-N-アセチルグルコサミニダーゼ
由黑色素普雷沃氏菌产生的内切-β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶 (99.0)
  • DOI:
  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    西村優伸;財津真生;伊藤和央
  • 通讯作者:
    伊藤和央
Prevotella melaninogenicaの産生する宿主糖タンパク質糖鎖遊離酵素の高発現系の構築と立体構造の解析
黑色素普雷沃菌宿主糖蛋白糖链释放酶高表达体系构建及三维结构分析
  • DOI:
  • 发表时间:
    2020
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    大倉和貴;森 真司;神谷信夫;宮原郁子;伊藤和央
  • 通讯作者:
    伊藤和央
Prevotella bivia(100)の産生するエンド-β-N-アセチルグルコサミニダーゼ
普雷沃氏菌产生的内切-β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶 (100)
  • DOI:
  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    財津真生;西村優伸;伊藤和央
  • 通讯作者:
    伊藤和央
エンド-β-N-アセチルグルコサミニダーゼ HSのX線結晶構造解析
内切-β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶 HS 的 X 射线晶体结构分析
  • DOI:
  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    倉内郁哉;大倉和貴;田中里佳;細川千絵;伊藤和央;宮原郁子
  • 通讯作者:
    宮原郁子
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    $ 2.83万
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内切β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶C_1和C_<11>大规模制备方法的开发
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    X00120----387068
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    1978
  • 资助金额:
    $ 2.83万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research
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