Identification of Emphysema Specific Degradation Marker

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計画１　MMP1による肺気腫特異的細胞外基質分解産物をはじめとした特異的生体分子のスクリーニングと同定モデルマウスを用いた１次スクリーニング、２次スクリーニングとしてBALおよび血清で同定可能な物質を選択（臨床応用を目標としているため、これらのサンプルから検出可能な分子を選択）、さらに３次スクリーニングとしてMMP1阻害剤を用いMMP1発現特異的な肺気腫関連分子の同定のステップを通して候補遺伝子を同定すを行った。この結果として６分子の肺気腫特異的生体分子候補を同定した。計画２　上記６候補分子のin vitro/vivoでの確認と、検出系の確立１）生化学的アッセイ―MMP1と候補タンパク質を用い生化学的にその分解活性を検定する。具体的には、分解活性の時間・量依存性を確認し、分解産物の切断箇所を同定する。３分子が精製した活性型MMP1による、基質として時間及び量依存的分解活性を確認した。また候補分子に関しては、マウスおよびヒト両方のタンパクを用い臨床応用する際に問題が生じないことも確かめた。２）Neo-epidope抗体の確立―上記の実験で同定した候補分子のMMP1による切断部位を中心にneo-epidope抗体樹立のためのペプチドを設計および再設計を行った。尚、また基質活性が無かった残りの３分子についてはpathway analysisによる制御機構に関する仮説モデルを作成した。これによると２分子については、key regulatorとなっている事が示唆され非酵素基質分子ながら肺気腫の病態形成に関わる特異的分子である可能性が高い。