Elucidation of pathogenic acquisition mechanism from the crystal structure of the collagen-binding proteins of Streptococcus mutans
从变形链球菌胶原结合蛋白的晶体结构阐明致病获取机制
基本信息
- 批准号:18K09735
- 负责人:
- 金额:$ 2.75万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
- 财政年份:2018
- 资助国家:日本
- 起止时间:2018-04-01 至 2024-03-31
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
Streptococcus mutansが産生するコラーゲン結合タンパク質Cnm/Cbmは約120kDaのタンパク質で、コラーゲン結合ドメイン(CBD)を介してコラーゲンに結合する。この結合メカニズムを解明するために、CBDを構成する4つのドメイン、N1、Linker、N2、Latchに着目し解析を進めてきた。これまでに4つのドメインを組み替えた変異体を作製し、CDによる熱安定性測定とELISAによるコラーゲン結合活性測定を行うことにより、これら4つのドメインの役割をそれぞれ、N1:コラーゲンとの結合に寄与する、Linker:N1、N2を補助しコラーゲン結合を支持する、N2:構造安定性、コラーゲンとの結合において中心的役割を担う、Latch:N2を補助し、N2と相互作用することでコラーゲン結合を支持する、と予想している。本年は、Cbm_CBDの4つのドメインの予想される機能と構造の相関を結晶構造学的に裏付けることを目的に、前年に引き続き、これまでに作製したCbm_CBDの各領域変異体の結晶化を継続実施した。一方、本研究では大腸菌を用いてCbm_CBDのWTおよび19変異体の計20種の目的タンパク質を発現しているが、その過程において、Cbm_CBDの可溶性発現量は100㎎/培地1Lにもなり、精製後の最終収量が非常に多いという点、および、コラーゲンとの結合についてはKD: 3.17 micro-M を示すことを明らかにしてきた。そこで、これらの特徴を利用したコラーゲンカラムとしての活用法を検討した。カラム担体へのコラーゲンとの結合が最適な条件を設定したのち、昨年度作製したGFP_Cbmを用い、コラーゲンカラムとしての有用性を検討した。
Streptococcus mutans are produced in the presence of Cnm/Cbm, a protein of approximately 120 kDa, and in the presence of CBD. The combination of CBD, N1, Linker, N2 and Latch is analyzed. N1: Thermal stability determination, ELISA binding activity determination, N2: Structural stability determination, N1: Thermal stability determination, N2: Structural stability determination, N1: Thermal stability determination, N2: Structural stability determination, N2: Thermal stability determination, ELISA binding activity determination, N1: Thermal stability determination, N2: Structural stability determination, N1: Thermal stability determination, N2: Structural stability determination, N3: Structural stability determination, N2: Structural stability determination, N2 N2 support, N2 interaction, N2 interaction, N2 This year, Cbm_CBD has four different types of crystallization, including function, structure and structure. On the one hand, in this study, a total of 20 target substances including WT and 19 variants of Cbm_CBD were discovered when using coliform bacteria. During the process, the soluble amount of Cbm_CBD was less than 100 μ g/cultivation of 1 L, and the final yield after purification was very high. It is also clear that the KD of KD: 3.17 micro-M can be achieved due to the combination of kurangin. This article discusses the use of the following characteristics: The optimal conditions for the combination of GFP_Cbm and GFP_Cbm are set and discussed.
项目成果
期刊论文数量(4)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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- DOI:
- 发表时间:2018
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Hirata;Imura;Sugahara;Natsume;H. Nakamura;Y. Kondo
- 通讯作者:Hirata;Imura;Sugahara;Natsume;H. Nakamura;Y. Kondo
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ら
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