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腫瘍浸潤Tリンパ球のT細胞受容体のがん特異性の検証と新規がん抗原の同定

验证肿瘤浸润T淋巴细胞的T细胞受体的癌症特异性并鉴定新型癌症抗原

基本信息

批准号：
18K15268
负责人：
下岡清美
金额：
$ 2.66万
依托单位：
University of Toyama
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-04-01 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18K15268/
关键词：
T細胞がん特異的TCR がん治療遺伝子治療 T細胞受容体がん抗原 TCR

项目摘要

申請者らのグループは、極めて短期間に単一T細胞からT細胞受容体（TCR）遺伝子を取得してレパートリー解析および機能評価を可能とする、世界が注目する画期的な方法を確立した。これらの技術をTCR遺伝子治療に臨床応用するには、腫瘍浸潤リンパ球（TIL）中から取得したTCRの癌特異性を検証するシステムが必要不可欠である。本研究では、がん患者のTILから得られたTCR遺伝子を既存のがん細胞株に患者HLAを発現させた細胞株を作製してがん特異性を検証する新しいシステムの確立を試みた。腫瘍細胞のB7発現細胞株の作製と反応増強と脱メチル化処理の効果の検証：モデル抗原としてNY-ESO-1を設定し、脱メチル化処理による発現増強の確認とNY-ESO-1特異的1G4 TCRを発現させたT細胞での反応性の評価を行い、脱メチル化処理の効果を示した。また、がん細胞株にB7分子（CD80）を発現させた場合、IFN-γ産生が4倍ほど増加することがわかった。乳がん細胞株MCF-7を用いて、TIL由来TCRの腫瘍細胞反応性の検証：患者HLAおよびB7分子を発現させたがん細胞株とTIL由来TCRを発現させたT細胞を共培養し、IFN-γの産生を指標に腫瘍反応性を検証した。その結果、現在のところまで、乳がん患者3名から14種類のTCRを解析し、HLA-A*03:01とA*11:01特異的なTCRそれぞれ1種類取得できた。MCF-7のcDNAライブラリーを作製し、COS-7細胞にB7分子およびHLAを発現させた細胞株を作製し、抗原が同定できないか検討している。

The applicant shall establish a method for obtaining T-cell receptor (TCR) gene in a short period of time, analyzing it and evaluating its function in a short period of time and attracting worldwide attention. This technique is necessary for clinical use of TCR gene therapy in order to obtain cancer-specific TCR diagnosis. This study attempts to establish a new system of TCR gene expression in existing cell lines and HLA gene expression in patients, and to demonstrate specificity in cell lines. Identification of the effects of treatment with NY-ESO-1 and NY-ESO-1 specific 1G4 TCR on the production, enhancement and dedifferentiation of tumor cells in B7-derived cell lines. When B7 molecule (CD80) was detected in cell lines, IFN-γ production increased by 4-fold. The expression of HLA and B7 molecules in breast cancer cell line MCF-7 and TCR-1 was detected by co-culture and IFN-γ production. The results showed that there were 3 patients with HLA-A*03:01 and A*11:01 with TCR analysis of 14 types. MCF-7 cDNA fragment production, COS-7 cell B7 molecule and HLA development, cell line production, antigen identification, and detection