膵がんにおけるVasohibin-2の役割と作用機構の解明

阐明 Vasohibin-2 在胰腺癌中的作用和作用机制

基本信息

批准号：
18K15205
负责人：
飯田理恵
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-04-01 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

KPCマウスは、KRASの恒常活性型変異体(G12D)とp53の変異体(R172H)を膵臓局所的に発現させることで膵がんの自然発症を引き起こすマウスモデルとして広く用いられている。本研究では、膵がんにおけるVasohibin-2 (Vash2) の役割について検討するために、KPCマウス由来がん細胞やヒト膵がん細胞株にVash2のshRNAプラスミドを導入して恒常的にノックダウンした細胞を作製し、増殖能、遊走能、浸潤能を評価した。その結果、Vash2ノックダウン細胞株では遊走能、浸潤能の低下が見られた。KPCマウス由来膵がん細胞をマウスに尾静脈注射し肺転移の評価を行った結果、Vash2をノックダウンした細胞株を注射した場合では顕著な肺転移の抑制が見られた。同所移植モデルにおいても、Vash2ノックダウン細胞株を移植した場合では膵がんの進行が抑制されていた。次に、個体レベルでの検証のためにKPC/Vash2野生型マウスとKPC/Vash2欠損マウスの比較を行った結果、Vash2欠損マウスでは多臓器への浸潤・転移が著しく抑制されていた。膵がんにおけるVash2の遺伝子発現制御について明らかにするため、コントロール細胞株と、Vash2ノックダウン細胞株を用いてマイクロアレイを行い、Pathway解析を行ったところ、骨髄由来免疫抑制細胞(MDSC)を誘導するケモカインやサイトカインの発現が主に変化していることがわかった。そこで、KPCマウスで自然発症した膵がん組織において免疫組織化学染色を行った結果、KPC/Vash2欠損マウスの腫瘍組織内では、MDSC数が減少しており、CD8陽性T細胞の浸潤が上昇していた。以上の結果から、Vash2はがん細胞自身の遊走を促進することに加え、抗腫瘍免疫の回避を引き起こすことで膵がんの進行に寄与していることが示唆された。

KPC小鼠被广泛用作小鼠模型，通过局部表达稳态突变体（G12D）和p53突变体（R172H）的Kras局部局部来引起胰腺癌的自发发展。在这项研究中，为了研究血管肽-2（VASH2）在胰腺癌中的作用，我们将VASH2的shRNA质粒引入了KPC小鼠衍生的癌细胞和人类胰腺癌细胞系中，以产生组成型敲低细胞，并评估其增殖，移民和侵入性。结果，VASH2敲低细胞系显示出迁移和侵入性能力的降低。通过对肺部静脉中源自KPC小鼠的胰腺癌细胞的注射胰腺癌细胞的评估结果，当注入了带有VASH2敲低的细胞线时，结果显示出对肺转移的显着抑制。在原位移植模型中，当Vash2敲低细胞系移植时，胰腺癌进展被抑制。接下来，为了在单个水平进行验证，我们将KPC/VASH2野生型小鼠和KPC/VASH2缺乏小鼠进行了比较，发现在VASH2缺陷型小鼠中，侵袭和转移与多个器官受到了显着抑制。为了阐明胰腺癌中VASH2基因表达的调节，使用对照细胞系和VASH2敲除细胞系进行了微阵列，并进行了途径分析，发现趋化因子和细胞因子的表达会诱导骨髓胶质的免疫抑制细胞（MDSC）。因此，在KPC小鼠中自发发展的胰腺癌组织进行了免疫组织化学染色，并增加了KPC/VASH2缺陷小鼠的肿瘤组织中MDSC的数量，并增加了CD8阳性T细胞的侵袭。以上结果表明，VASH2通过促进癌细胞迁移本身并引起抗肿瘤免疫力来促进胰腺癌的发展。