Vasohibin-2による横紋筋肉腫の悪性化制御機構の解明と新規治療法の開発

阐明Vasohibin-2控制横纹肌肉瘤恶性进展的机制并开发新的治疗方法

• 批准号: 21K07089
• 负责人: 鈴木 康弘
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2023-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K07089/
• 关键词: vasohibin; VASH2; SVBP; 微小管; がん悪性化; 脱チロシン化; チューブリン; 液ー液相分離; Vasohibin-2; 横紋筋肉腫; チューブリン脱チロシン化酵素; 微小菅翻訳後修飾; Vasohibin

バキュロウイルスによる蛋白発現系でGFPを付与したVASH2-SVBP複合体とVASH1-SVBP複合体および各種VASH変異体-SVBP複合体蛋白の合成と精製を行い、ポリエチレングリコールを含有するバッファー内における液-液相分離現象を確認したところ、VASHのα-チューブリン脱チロシン化活性を欠損する変異体とVASHのN末端とC末端にある天然変性（disorder）領域を双方とも欠損する変異体においても野生型VASHと同様に液-液相分離を誘導することを確認した。また、VASHのN末側order領域の一部を欠損することによって、VASH-SVBP複合体形成に明確な影響は認められないが、蛋白安定性が減弱する傾向が確認された。NanoLucルシフェラーゼ断片と高い親和性のあるHiBiTタグをC末端に付与した各種VASH2変異体とSVBPを細胞に強制発現させ、細胞が合成するVASH2-SVBP複合体の細胞内蛋白量と培養液中の細胞外分泌量をルシフェラーゼ活性で測定したところ、SVBPとの複合体形成に必要とされるVASH2側のアミノ酸配列に変異を加えることで、野生型と比して変異VASH2の細胞内蛋白量と細胞外分泌量が連動して減少することを確認した。精製VASH2-SVBP 複合体は細胞外刺激性に培養血管内皮細胞の機能に明確な影響を与えなかった。VASH2 mRNAのExon7を標的とするアンチセンスオリゴをヒト胞巣型横紋筋肉腫細胞株に導入することによって、細胞内のVASH2蛋白量が減少し、これに伴いα-チューブリンの脱チロシン化レベルが抑制されることを確認した。

The protein production system of VASH 2-SVBP complex, VASH1-SVBP complex and various VASH hetero-SVBP complex proteins were synthesized and purified by GFP. The liquid-liquid phase separation phenomenon was confirmed. VASH α-terminal and C-terminal isoforms were identified. A part of the VASH terminal order domain was damaged, and the tendency of protein stability to decrease was confirmed. NanoLuc 2-SVBP complex has high affinity for VASH2-SVBP fragments, high affinity for VASH2-SVBP complexes, high It was confirmed that the intracellular protein content and extracellular secretion of wild-type VASH2 decreased in tandem. Purified VASH2-SVBP complex has a clear effect on extracellular stimulation and function of cultured vascular endothelial cells. The expression of VASH2 mRNA in Exon7 was detected by PCR and the expression of VASH2 protein in cells was inhibited by the expression of VASH2 mRNA in Exon 7.

项目成果

難治がんに対する革新的治療法の開発

开发顽固性癌症的创新疗法

Vasohibin-1による細胞内輸送調節を通したシグナル伝達制御機構とその役割

Vasohibin-1 调节细胞内转运的信号转导控制机制及其作用

• 发表时间: 2021
• 作者: 小林 美穂;藤原 花汐;鈴木 康弘;若林 育海;中山 雅敬;佐藤 靖史; 渡部 徹郎
• 通讯作者: 渡部 徹郎

Vasohibin研究の概要と最新情報

血管抑制素研究概述和最新信息

• 发表时间: 2022
• 作者: Takuya Uehata;Shinnosuke Yamada;Masaki Miyazaki;Amir Giladi;Alexis Vandenbon;Ido Amit;Hiroshi Kawamoto;Osamu Takeuchi;鈴木康弘
• 通讯作者: 鈴木康弘

αチューブリン脱チロシン化酵素Vasohibin-2を標的とした新規がん治療法の開発

开发针对 α-微管蛋白脱酪氨酸酶 Vasohibin-2 的新型癌症疗法

• 发表时间: 2021
• 作者: Komiyama Makoto;Shigi Narumi;Ariga Katsuhiko;鈴木 康弘
• 通讯作者: 鈴木 康弘

Vasohibin-2とSVBPとの相互作用を抑制する低分子化合物の探索

寻找抑制 Vasohibin-2 和 SVBP 之间相互作用的低分子量化合物

• 发表时间: 2021
• 作者: 古谷 裕;樋口 祥子;鈴木 康弘;佐藤 靖史
• 通讯作者: 佐藤 靖史