Development of complex amino acid added medium by optimizing fatty acid metabolism function to in vitro matured oocytes

マウス体外成熟培地へのL-carnitine添加が細胞質内のエネルギー代謝機構に関与する関連遺伝子群に与える影響を検討した。供試マウスとして、成熟齢に達したICRマウス(Kwl:ICR)を用いた。常法により採取された卵巣を細切しGV期卵子を回収した。回収したGV期卵子は卵丘細胞を除去し、L-carnitineを添加した体外成熟培地にて体外成熟を行なった。成熟した卵子は常法に従って体外受精を行い胚盤胞期まで発生させた。一部の体外成熟卵および胚はRNA抽出を行い、L-carnitineに関連する代謝遺伝子を逆転写PCRにて定量した。L-carnitineを添加した場合、成熟後得られた卵子を体外受精した結果、胚盤胞期胚への発生成績は非添加区よりも向上する傾向が認められた。逆転写PCRの結果、桑実期胚にて代謝関連遺伝子は非添加区よりも高い発現量を示す事を認め、カルニチン経由にて活性化する遺伝子(Cpt2)の発現量は体外受精胚よりも体外成熟由来胚で高い発現量を認めた。一方で、通常の代謝で用いられる遺伝子(Mpc2)の発現量は体外受精胚よりも体外成熟由来胚で低下し、L-carnitineの添加により体外受精胚よりも高い発現量を示した。以前より、体外成熟由来胚は、桑実期胚までの緩やかな発生成績の減少と、桑実期胚から胚盤胞期胚にて発生率の急激な低下を認めていたが、L-carnitineの添加による体外成熟環境の改善が発生段階における遺伝子発現の変化によるエネルギー代謝を補完し、胚盤胞期胚への発生成績を改善した可能性が示唆される。また、より定量的に実験を進めるため、Real-Time PCRのプロトコールを確立した。なお、これらの成果の一部は第65回日本実験動物学会総会にて報告した。

マウス体外成熟培地へのL-carnitine添加が細胞質内のエネルギー代謝機構に関与する関連遺伝子群に与える影響を検討した。供試マウスとして、成熟齢に達したICRマウス(Kwl:ICR)を用いた。常法により採取された卵巣を細切しGV期卵子を回収した。回収したGV期卵子は卵丘細胞を除去し、L-carnitineを添加した体外成熟培地にて体外成熟を行なった。成熟した卵子は常法に従って体外受精を行い胚盤胞期まで発生させた。一部の体外成熟卵および胚はRNA抽出を行い、L-carnitineに関連する代謝遺伝子を逆転写PCRにて定量した。L-carnitineを添加した場合、成熟後得られた卵子を体外受精した結果、胚盤胞期胚への発生成績は非添加区よりも向上する傾向が認められた。逆転写PCRの結果、桑実期胚にて代謝関連遺伝子は非添加区よりも高い発現量を示す事を認め、カルニチン経由にて活性化する遺伝子(Cpt2)の発現量は体外受精胚よりも体外成熟由来胚で高い発現量を認めた。一方で、通常の代謝で用いられる遺伝子(Mpc2)の発現量は体外受精胚よりも体外成熟由来胚で低下し、L-carnitineの添加により体外受精胚よりも高い発現量を示した。以前より、体外成熟由来胚は、桑実期胚までの緩やかな発生成績の減少と、桑実期胚から胚盤胞期胚にて発生率の急激な低下を認めていたが、L-carnitineの添加による体外成熟環境の改善が発生段階における遺伝子発現の変化によるエネルギー代謝を補完し、胚盤胞期胚への発生成績を改善した可能性が示唆される。また、より定量的に実験を進めるため、Real-Time PCRのプロトコールを確立した。なお、これらの成果の一部は第65回日本実験動物学会総会にて報告した。