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リポソームを用いたエキソソーム内ｍｉｃｒｏＲＮＡの高感度検出法の開発

使用脂质体开发外泌体中 microRNA 的高灵敏度检测方法

基本信息

批准号：
16J40215
负责人：
津金麻実子
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Chuo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-07-27 至 2020-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16J40215/
关键词：
リポソームエキソソームマイクロRNA RT-PCR

项目摘要

昨年度までに、リポソーム内でmiRNAを等温増幅し、検出することに成功した。これはプライマー、DNAポリメラーゼ、制限酵素を用いて標的microRNAを55℃の等温で増幅し、蛍光プローブ（SYBR GreenⅠ）で検出する方法である。本年度は等温増幅反応試薬内封リポソームとエキソソームと融合させ、リポソーム内でエキソソーム由来microRNAの検出を試みた。オクタデシルローダミンで膜染色したエキソソームと核酸等温増幅反応の反応液を内封したリポソームを混合後、電気刺激により膜融合させて55℃で2時間反応させた。しかし、リポソーム内でSYBR GreenⅠの蛍光は観察されなかった。電気融合はエレクトロポレーション用のキュベットを用いたが融合効率が低いことや、エキソソーム内のmiRNA濃度が低いことが理由として考えられる。最近、カバーガラスとアルミテープで作製した電気融合チャンバーを用いると融合効率が高く、さらに顕微鏡観察下で融合を実施できることがわかった。そこで、融合効率を上げるためのマイクロチャンバーデバイスの開発を行った。

Last year, the miRNA isothermal amplitude was measured, and the output was successful. The method for the preparation of restriction enzyme was determined by using the isothermal temperature of microRNA at 55 ℃ and the temperature of SYBR Green I (SYBR Green I). In the current year, the isothermal range is different. This year, the temperature response is very high. This year, the isothermal amplitude is different. This year, the isothermal amplitude is different. This year, the isothermal amplitude is different. This year, the isothermal range, the temperature range, the temperature, the temperature, the After the isothermal amplitude reverse chromatography of nucleic acid, the inner seal of the solution was mixed, and the electric stimulation was used to detect the fusion of the film at 55 ℃ for 2 hours. In the first place, please check the light of the SYBR Green I. The fusion rate is very low, and the miRNA level is low. The reason for this is that the reason for the low temperature is very high. Recently, there has been a high rate of fusion in the field of computer fusion, which has been widely used in the field of computer fusion. On the basis of the information and integration rates, we need to make sure that there is a significant increase in the number of people who do not want to do so.