ＲＯＳ応答するラベル化分子の設計と条件付きプロテオミクスへの展開

响应ROS的标记分子的设计及其在条件蛋白质组学中的应用

• 批准号: 17F17344
• 负责人: 浜地 格
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017-11-10 至 2020-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17F17344/
• 关键词: プロテオミクス; タンパク質ラベリング

本研究では、多くの活性酸素（窒素）種の中でも過酸化水素に的を絞り、過酸化水素と選択的に反応し、反応活性が大幅に向上するようなconditional proteomicsのためのラベル化剤の分子設計を行った。過酸化水素応答ユニットに、イメージング／濃縮のための親和性タグ（フルオレセインなどの蛍光団）を繋いだ分子を合成し、これを用いて生細胞での過酸化水素応答挙動を評価した。その結果、細胞外から添加した過酸化水素に応答して細胞内タンパク質のラベル化が大きく加速されるだけでなく、細胞刺激によってROSを内在的に発生させた場合にもはっきりとしたラベル化の亢進が見られることをWestern blottingによって生化学的に確認した。従って、過酸化水素に応答して生細胞系でのプロテオミクスに利用できる初めての化学プローブの合成に成功したと言える。また、ラベル化はイメージングによっても明瞭に確認でき、特に固定化後もその蛍光画像が維持されるという特徴を有していた。さらに、これらの利点にMSMS解析を組み合わせて、内在性過酸化水素発生に伴うconditional proteomicsを実施し、マクロファージ細胞内で、過酸化水素が濃縮される小胞体ベシクルの実体解明に成功した。

In this study, the では, multi-active acid (sulfide) species, the を twist of the overacidified hydrogen, the を twist of the overacidified hydrogen, the にreaction of the overacidified hydroxide, the reaction active が大に上するようなconditional Proteomics is a molecular design tool. Overacidified hydrochloric acid solution, イメージング／concentrated のためのaffinity タグの蛍光団) を system いだ molecule を synthesis し, こ れ を い て raw cells で の peracidified hydrogen 濜 挙 动 を 価 し た.その Results, extracellular からAdd したperacidified water に応 Answer してIntracellular タンパク性のラベル化が大きくAccelerate されるだけでなく, fine cells Cell stimulation によってROSをInner に発生させたoccasion にもはっきりとしたラベル化の Hyperactivity が见られることをWestern Confirmation of blotting and biochemistry.従って, overacidified hydrogen chloride solution して raw cell line でのプロテオミクスにUtilize the chemical プローブのsynthetic success of the したと言える.また、ラベル化はイメージングによっても明にconfirmationでき、特にAfter the fixation, the image of the light is maintained and the image is maintained.さらに、これらの利PointにMSMSanalyticsをgroupみ合せて、Intrinsic overacidification hydrogenation conditional Proteomics, マクロファージ, intracellular で, over-acidified water, concentrated される small cell body, ベシクルの実 body solution, successful した.

项目成果

Profiling of proteins under oxidative environments in cells and tissues by H2O2-responsive labeling

通过 H2O2 响应标记分析细胞和组织氧化环境下的蛋白质

• 发表时间: 2020
• 作者: Zhu Hao;Tamura Tomonori;Hamachi Itaru;Hao ZHU
• 通讯作者: Hao ZHU

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