课题基金 / 基金详情

ＲＯＳ応答するラベル化分子の設計と条件付きプロテオミクスへの展開

ＲＯＳ応答するラベル化分子の設計と条件付きプロテオミクスへの展開
响应ROS的标记分子的设计及其在条件蛋白质组学中的应用
批准号：
17F17344
负责人：
浜地 格
金额：
$1.54万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2017
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
2017-11-10 至 2020-03-31
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17F17344/
关键词：
プロテオミクスタンパク質ラベリング

项目摘要

项目成果

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中文摘要
翻译
本研究では、多くの活性酸素（窒素）種の中でも過酸化水素に的を絞り、過酸化水素と選択的に反応し、反応活性が大幅に向上するようなconditional proteomicsのためのラベル化剤の分子設計を行った。過酸化水素応答ユニットに、イメージング／濃縮のための親和性タグ（フルオレセインなどの蛍光団）を繋いだ分子を合成し、これを用いて生細胞での過酸化水素応答挙動を評価した。その結果、細胞外から添加した過酸化水素に応答して細胞内タンパク質のラベル化が大きく加速されるだけでなく、細胞刺激によってROSを内在的に発生させた場合にもはっきりとしたラベル化の亢進が見られることをWestern blottingによって生化学的に確認した。従って、過酸化水素に応答して生細胞系でのプロテオミクスに利用できる初めての化学プローブの合成に成功したと言える。また、ラベル化はイメージングによっても明瞭に確認でき、特に固定化後もその蛍光画像が維持されるという特徴を有していた。さらに、これらの利点にMSMS解析を組み合わせて、内在性過酸化水素発生に伴うconditional proteomicsを実施し、マクロファージ細胞内で、過酸化水素が濃縮される小胞体ベシクルの実体解明に成功した。
英文摘要
本研究では、多くの活性酸素（窒素）種の中でも過酸化水素に的を絞り、過酸化水素と選択的に反応し、反応活性が大幅に向上するようなconditional proteomicsのためのラベル化剤の分子設計を行った。過酸化水素応答ユニットに、イメージング／濃縮のための親和性タグ（フルオレセインなどの蛍光団）を繋いだ分子を合成し、これを用いて生細胞での過酸化水素応答挙動を評価した。その結果、細胞外から添加した過酸化水素に応答して細胞内タンパク質のラベル化が大きく加速されるだけでなく、細胞刺激によってROSを内在的に発生させた場合にもはっきりとしたラベル化の亢進が見られることをWestern blottingによって生化学的に確認した。従って、過酸化水素に応答して生細胞系でのプロテオミクスに利用できる初めての化学プローブの合成に成功したと言える。また、ラベル化はイメージングによっても明瞭に確認でき、特に固定化後もその蛍光画像が維持されるという特徴を有していた。さらに、これらの利点にMSMS解析を組み合わせて、内在性過酸化水素発生に伴うconditional proteomicsを実施し、マクロファージ細胞内で、過酸化水素が濃縮される小胞体ベシクルの実体解明に成功した。
期刊论文(4)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Profiling of proteins under oxidative environments in cells and tissues by H2O2-responsive labeling
通过 H2O2 响应标记分析细胞和组织氧化环境下的蛋白质
DOI： --
发表时间： 2020
期刊：
影响因子： --
作者： [Zhu Hao, Tamura Tomonori, Hamachi Itaru, Hao ZHU]
通讯作者： Hao ZHU
京都大学浜地研究室ホームページ
京都大学滨町实验室主页
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Development of organic chemistry targeting biomolecules in live animals
  • 批准号：
    23H05405
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Specially Promoted Research
  • 资助金额：
    $389.79万
  • 财政年份：
    2023
  • 负责人：
    浜地 格
  • 依托单位：
    Kyoto University
リガンド指向性化学の展開と新しい共有結合型阻害剤の開発
  • 批准号：
    22F31791
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
  • 资助金额：
    $1.47万
  • 财政年份：
    2022
  • 负责人：
    浜地 格
  • 依托单位：
    Kyoto University
リガンド指向性化学の展開と新しい共有結合型阻害剤の開発
  • 批准号：
    22F21791
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
  • 资助金额：
    $1.47万
  • 财政年份：
    2022
  • 负责人：
    浜地 格
  • 依托单位：
    Kyoto University
生細胞表層工学の新手法の開発と応用
  • 批准号：
    21F21701
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
  • 资助金额：
    $1.47万
  • 财政年份：
    2021
  • 负责人：
    浜地 格
  • 依托单位：
    Kyoto University
海外基金