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ウイルスの標的化、細胞内侵入、エンドソーム脱出能を移植した新規ナノキャリアの開発

开发能够靶向病毒、进入细胞并逃离内体的新型纳米载体

基本信息

批准号：
17J06926
负责人：
劉秋実
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2017
资助国家：
日本
起止时间：
2017-04-26 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、B型肝炎ウイルス(HBV)の外皮Lタンパク質粒子(バイオナノカプセル；BNC)の研究を通して得られたHBV 由来「能動的標的化機構、細胞内侵入機構、エンドソーム脱出機構」を解析及び活用し、リポソーム（LP）等の脂質ナノキャリアに同機能を再構成することを目指す。NTCP（Na-taurocholate co-transporting polypeptide）が唯一のHBV受容体とされてきたが、我々はミリストイル修飾したBNC（HBVモデル）を用いて、細胞内侵入過程における同受容体の役割を解析した結果、HBVが当初細胞表面に結合するのは細胞表層NTCP受容体でなく、HSPG（heparan sulfate proteoglycan）受容体が支配的であることを示した。私はHBVの細胞接着、細胞内侵入に関するHSPG受容体との結合領域（pre-S1領域のアミノ酸30-42残基）を同定した。HBVジェノタイプ間で高度的に保存されたアミノ酸残基（Asp-31、Trp-32、Asp-33）はヘパリン結合に対して不可欠である。本年度は、HBVの能動的標的化機構、細胞内侵入機構を担う当ペプチドを中性LPに提示し、ペプチドのモル比、提示されたペプチドLPの粒子径やゼタ電位などの物性条件を検討し、臨床応用に近い化成品の最適化をした。また、作製されたペプチドLPにLuciferase siRNAや緑色蛍光タンパク質発現プラスミドを内封し、細胞質送達を行ったが、エンドソーム脱出が不十分のため、細胞内の遺伝子発現は検出されなかった。今後、効率的なエンドソーム脱出機構の搭載が必要と考えている。本研究の成果は、HBV治療薬の全く新しい創薬ポイントを提供する。また、HBV初期感染機構を分子レベルで明らかにしたものであり、ウイルス由来でありながら人工DDSナノキャリアの実用化に大きく貢献する。

In this study, でで, hepatitis B ウ <s:1> ススススス(HBV) <s:1> outer skin Lタ <e:1> パ <s:1> granular particles (バ <s:1> ナノカプセナノカプセナノカプセナノカプセバ) BNC) のを tong して have られた HBV origin "move of the underlying mechanism, cell invasion mechanism, エンドソーム out institutions" を parsing and び appropriate し, リポソーム (LP), and other の lipid ナノキャリアに flight to constitute す again をることを refers す. NTCP (Na-taurocholate co-transporting Polypeptide) がの HBV is only let body とされてきたが, I 々はミリストイル modified した BNC (HBV モデル) を with いて, cell invasion process における endure let body cut をの service parsing した results, as well as the combination of HBV が original cell surface にするのは cells respond to let the body surface NTCP でなく, HSP The であるとをとをとを of G (heparan sulfate proteoglycan) that is governed by the volume が shows たた. The private <s:1> HBV <e:1> cells then invade the に related するHSPG receptor と the <s:1> binding domain (pre-S1 domain <s:1> アをノ acid 30-42 residues) を homopast た. HBV ジェノタイプで height between に save されたアミノ acid residues (Asp - 31, Trp - 32, Asp - 33) はヘパリン combining にし seaborne て not owe である. は this year, the target of the institutions of HBV の activism, cells into institutions を bear う when ペプチドを neutral LP にし, ペプチドのモル ratio, prompt されたペプチド LP の particle diameter やゼタ potential などの physical conditions を beg し検, clinical 応に finished nearly いの optimization をした. また, cropping されたペプチド LP に Luciferase siRNA や蛍 green light タンパク qualitative 発 now プラスミドを photosensitive し, cytoplasm served をったが, エンドソーム out が not quite のため, intracellular の but 伝発 now は検 out されなかった. In the future, the efficiency of なエ, ドソ, ドソ, ム will be carried out by institutions that <s:1> will conduct が necessary と tests on えて and る. The <s:1> results of this study ポ, HBV therapeutic drug, all of which are く, and the newly created drug, ポ and <s:1> トを are provided by する. また, HBV infection early institutions を molecular レベルで Ming らかにしたものであり, ウイルス origin でありながら artificial DDS ナノキャリアの be in turn に big きく contribution する.