転写共役因子ＹＡＰ１／ＴＡＺとクロマチン構造変換複合体の関係性の解析

转录辅助因子YAP1/TAZ与染色质结构转换复合物关系分析

基本信息

批准号：
18J14017
负责人：
長島俊太
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-04-25 至 2020-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18J14017/
关键词：
Hippo pathway SWI/SNF 細胞増殖筋分化 TAZ/YAP1 クロマチン構造変換複合体細胞分化

项目摘要

今年度は、BAF60aとTAZの相互作用がもつ生理的意義の解明を試みた。SWI/SNF複合体は遺伝子転写を活性化する複合体であると、一般には考えられる。従って、BAF60aはTAZが共役する転写因子の標的遺伝子の転写を高めるという仮説が提示される。TAZと共役する代表的な転写因子はTEADである。そこで、BAF60aがTEADの標的遺伝子の発現を高めるかを検討した。EthacridineはTAZの脱リン酸化を引き起こしTAZを細胞核に集積する。HEK293細胞にethacridineを投与すると、TEAD標的遺伝子CTGF、CYR61の発現が上昇するが、TAZをノックダウンするとethacridineによる上昇が解除される。すなわち、HEK293細胞におけるCTGF、CYR61の発現はTAZ-TEAD活性の指標になる。ところが、BAF60aを発現させても、ノックダウンしてもCTGF、CTR61の発現には影響を認めない。また、TAZとTEAD4の相互作用にもBAF60aは影響しない。次に、HEK293細胞にMyogenin-promoter reporterを導入し、TAZ-MYODによるレポーター活性に対するBAF60aの影響を検討した。すると、予測に反して、BAF60aはレポーター活性を抑制し、BAF60aノックダウンはレポーター活性を上昇した。すなわち、BAF60aは意外にもTAZ-MYODに対して抑制的に作用することが明らかになった。BAF60aのホモログBAF60cはMYODと複合体を作り、筋分化関連遺伝子の発現を高めるという報告がある。BAF60cもTAZと結合することを私は確認している。したがって、BAF60aがBAF60cとTAZの相互作用に拮抗し、しかも、BAF60aはBAF60cと異なり、筋分化関連遺伝子に対して抑制的に作用する可能性が示唆される。

今年，我们试图阐明BAF60A和TAZ之间相互作用的生理意义。 SWI/SNF复合物通常被认为是激活基因转录的复合物。因此，提出了BAF60A的假设增强了TAZ偶联转录因子的靶基因的转录。结合到TAZ的典型转录因子是Tead。因此，我们研究了BAF60A是否会增加靶基因对TEAD的表达。乙酰丙氨酸引起TAZ的去磷酸化，并在细胞核中积聚TAZ。给予HEK293细胞的乙酰氨酰胺会增加tead靶基因CTGF的表达，但是TAZ敲低释放了乙克酰胺诱导的乙克酰胺诱导的。也就是说，HEK293细胞中CTGF和CYR61的表达是TAZ-TEAD活性的指标。但是，即使表达或击倒BAF60A，也未观察到CTGF或CTR61的表达影响。此外，BAF60A不会影响TAZ和TEAD4之间的相互作用。接下来，将肌蛋白促销记者引入了HEK293细胞中，并研究了BAF60A对TAZ-MYOD的报告对报告者活性的影响。与预测相反，BAF60A抑制了报告基因活性，而BAF60A敲低的活动增加了报告基因活性。换句话说，发现BAF60A出奇地对TAZ-MYOD作用了抑制作用。据报道，同源物BAF60C BAF60A与MyoD形成一个复合物，并增加了与肌肉分化相关基因的表达。我已经确认BAF60C也与TAZ结合。因此，建议BAF60A拮抗BAF60C和TAZ之间的相互作用，并且与BAF60C不同，BAF60A可能对与肌肉分化相关的基因作用。