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組織浸透性評価手法の確立による高機能かつ低副作用な二重特異性がん治療抗体の開発

通过建立组织渗透性评估方法开发高功能性和低副作用的双特异性癌症治疗抗体

基本信息

批准号：
22KJ1241
负责人：
前島敦
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Tokyo University of Agriculture and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

がん細胞とT細胞を標的とする二重特異性がん治療抗体Ex3は、両細胞間の強制的な架橋による、強力な抗がん活性の誘導を作用機序としている。しかし、がん非特異的なT細胞の活性化による副作用が課題となっている。そこで本研究では、Ex3のT細胞結合ドメインに、がんで発現が亢進しているマトリックスメタロプロテアーゼ（MMP）の認識配列を介して結合阻害ペプチドを融合することにより、副作用の低減を目指した。がん組織近傍に送達後、MMPによる消化により結合阻害ペプチドが外れることで、がん特異的に抗がん活性が回復することが期待される。また、結合阻害ペプチドとして、鎖長を調整することで立体障害による阻害が期待される、PASを用いた。これにより、抗体の配列に依存しない、より汎用的な設計が可能になると期待される。まず、PASの結合阻害ペプチドとしての有用性を明らかにするために、T細胞結合ドメインのみにPASを融合して、標的細胞への結合能を評価した。PASには、反復回数の異なるP40及びP100を用いた。結果、PASの分子量に依存した結合活性の低下、及びMMP認識配列の切断による結合活性の回復が確認できた。続いて、Ex3-FcにMMPの認識配列を介してP40およびP100を融合した分子を設計した。フローサイトメトリーで結合能を評価した結果、T細胞に対してのみPASの分子量に依存した結合阻害が確認され、コラゲナーゼ消化後には結合能が完全に回復した。また、がん細胞に対してはPASによる結合阻害は見られなかった。さらに、 in vitroで抗がん活性試験を行ったところ、PASの分子量に依存した抗がん活性の低下、及びMMP認識配列の切断による抗がん活性の回復が確認できた。また、T細胞活性化試験においても同様の結果が得られたことから、本抗体が全身でのＴ細胞の活性化を伴う副作用を低減できると期待される。

The dual-specific therapeutic antibody Ex3 targeted by T cells and T cells, the forced bridging between cells, and the powerful induction of anti-T cell activity are the mechanism of action. The problem of non-specific activation of T cells and side effects of しかし and がんとなっている.そこでThis study is about では, Ex3のT cell binding ドメインに, がんで発appears to be hyperactive しているマトリックスメタロプロテアーゼ(MMP) のcognition arrangement を introduce して combination blocking ペプチドを fusion することにより, side effects の reduce を ocular finger した. After the Japanese organization arrived, the MMP police digested the Japanese and combined them to stop the Japanese. The external れることで, がんspecific にanti-がんactivity がreply することがawait される.また, combined blocking ペプチドとして, lock length を adjustment することでthree-dimensional barrier による hindering がexpect される, PAS をいた. The design of the antibody, the coordination of the antibody and the dependence of the antibody, and the general design of the antibody are possible and expected. T The cell binding capacity is the PAS fusion, and the target cell binding energy is the evaluation. PAS には, repeated times のdifferent なるP40 and びP100 いた. As a result, the dependence of the molecular weight of PAS on the binding activity was reduced, and the recovery of the binding activity after cutting off the MMP recognition array was confirmed.続いて、Ex3-FcにMMPのcognition arrangementを IntroductionしてP40およびP100をfusionしたmoleculeをdesignした. Fiber binding energy evaluation result, T cell molecular weight of PASにDependence したbinding blockage がconfirmation され, コラゲナーゼAfter digestion, にはbinding can がcompletely restore した.また, がん Cell に対してはPAS による combines to block は见られなかった.さらに、in In vitro anti-がん activity test is done, PAS is molecular weight dependent and anti-がん activity is low, and MMP recognition array is cut off and anti-がん activity is restored and confirmed.また、T cell activation test験においても同様のRESULTSがgetられたことから、本Antibodies activate T cells throughout the body and are accompanied by side effects, which are expected to be reduced and reduced.