癌免疫治療薬への応用を目指す組換え型二重特異性抗体の蛋白質工学

重组双特异性抗体的蛋白质工程在癌症免疫治疗药物中的应用

• 批准号: 13750730
• 负责人: 浅野 竜太郎
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13750730/
• 关键词: 巻き戻し; 二重特異性抗体; diabody; 4-1BBL; interleukin-12; 癌胎児性抗原; 癌免疫療法; 抗腫瘍効果; 組換え体

本研究は、当研究室により世界で初めて巻き戻しによる調製に成功し、抗腫瘍効果を実証してきた癌抗原MUC1とリンパ球抗原CD3を標的とした最小の二重特異性抗体(Mx3 diabody)のさらなる機能改変を目的としている。今年度は、(1)二種のdiabodyの作製と併用の効果、(2)低免疫原性のエンハンス分子との融合、(3)他の癌抗原抗体を用いた汎用性の拡大、の観点から研究を進めた。実績は以下の通りである。(1)我々がクローニングした、リンパ球に共刺激シグナルを伝達する抗CD28抗体を用いて新たに作製したMx28 diabodyは単独でも抗腫瘍効果が見られ、さらにMx3 diabodyとの併用試験において、各々を混合した時よりもより低濃度で同等の効果、即ち相乗効果を得た。(2)現在、エンハンス分子として用いている黄色ブドウ球菌由来の変異型スーパー抗原(mSEA)に比べ、より低免疫原性であるヒト由来のリンパ球共刺激分子4-1BBLの巻き戻しによる調製系を世界で初めて確立し、diabodyとの融合を行ったところ従来のmSEAとの融合分子と同等の効果を得た。また同様に初めて巻き戻しによる調製に成功した抗腫瘍サイトカイン、ヒトinterleukin-12と抗体可変領域(Fv)との融合蛋白質を構築した。機能評価した結果、融合により抗腫瘍効果の大幅な上昇を観察した。これは抗体との融合により、癌細胞近傍へ抗腫瘍サイトカインを効率よく輸送出来たためと考えられる。(3)より普遍性が高い癌胎児性抗原(CEA)に対する抗体T84.66を用いて作製したCx3 diabodyは、従来のdiabodyと同等の抗腫瘍効果が様々な癌腫に対して見られた。以上により、抗腫瘍効果を有し、低免疫原性かつ汎用性のある新規癌免疫治療薬の可能性を十分に示すことが出来た。

The aim of this study is to demonstrate the efficacy of the Mx3 diabody as a target for cancer antigen MUC1 and CD3. This year,(1) the production and combination of two diabodies,(2) the fusion of low immunogenicity molecules,(3) the use of other cancer antigen antibodies, and the development of universal use. The following is a summary of the results. (1)The anti-CD28 antibody was produced in a new way, and the Mx28 diabody was produced in a single way. The anti-CD28 antibody was produced in a mixed way. (2)Now, the molecular structure of 4-1BBL has been established in the world, and the fusion of diabody and mSEA has been established. The fusion protein of anti-tumor antibody, interleukin-12 and antibody domain (Fv) was constructed successfully. Function evaluation results, fusion, anti-tumor results increased significantly. The antibody is fused to the tumor cells and the tumor cells are transported to the tumor cells. (3)The antibody T84.66, which is commonly used against high level carcinoma-fetal antigen (CEA), is used to control Cx3 diabody, which is used against cancer. The above results show that the anti-tumor effect is low, the immunogenicity is low, and the possibility of new cancer immunotherapy is very high.

项目成果

Ueno et al.: "T-cell Immunotherapy for Human MK-1-Expressing Tumors Using a Fusion Protein of the Superantigen SEA and Anti-MK-1 scFv Antibody"Anticancer research. 22 印刷中. (2002)

Ueno 等人：“使用超抗原 SEA 和抗 MK-1 scFv 抗体的融合蛋白对人类 MK-1 表达肿瘤进行 T 细胞免疫治疗”，出版中的抗癌研究 22。

Takemura et al.: "A mutated superantigen SEA D227A fusion diabody specific to MUC1 and CD3 in targeted cancer immunotherapy for bile duct carcinoma"Cancer Immunol Immunother. 51. 33-44 (2002)

Takemura 等人：“胆管癌靶向癌症免疫治疗中对 MUC1 和 CD3 具有特异性的突变超抗原 SEA D227A 融合双抗体”癌症免疫免疫疗法。

Tsumoto et al.: "Inhibition of hepatitis C virus NS3 protease by peptides derived from complementarity-determining regions(CDRs)of the monoclonal antibody 8D4 : tolerance of a CDR peptide to conformational changes of a target"FEBS Lett.. 525. 77-82 (2002)

Tsumoto 等人：“来自单克隆抗体 8D4 的互补决定区 (CDR) 的肽对丙型肝炎病毒 NS3 蛋白酶的抑制：CDR 肽对靶标构象变化的耐受性”FEBS Lett.. 525. 77-

Watanabe et al.: "Selection of human antibody fragments on the basis of stabilization of the variable domain in the presence of target antigens"Biochem Biophys Res Commun. 295. 31-36 (2002)

Watanabe 等人：“基于靶抗原存在下可变结构域的稳定性选择人抗体片段”Biochem Biophys Res Commun。

Kodama et al.: "Mutated SEA-D227A-conjugated antibodies greatly enhance antitumor activity against MUC1-expressing bile duct carcinoma"Cancer Immunology, Immunotherpy. 50. 539-548 (2001)

Kodama 等人：“突变的 SEA-D227A 缀合抗体极大地增强了针对表达 MUC1 的胆管癌的抗肿瘤活性”癌症免疫学、免疫疗法。