脂質ラフト内に構築された複合トランスポートソームに依存した魚類の淡水適応機構

鱼类的淡水适应机制依赖于脂筏中构建的复杂转运体

• 批准号: 24657053
• 负责人: 星島 一幸
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012-04-01 至 2013-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-24657053/
• 关键词: イオンホメオスタシス; 脂質ラフト; NHE3; 塩類細胞; アンモニア輸送体; Rhcg; トランスポートソーム

1. PLA法によるSuper transportsomeの可視化2種のタンパク質が近接し複合体を作っている場合にのみ蛍光が観察される新しい方法が開発されProximity ligation assay（PLA）ないしはDuolink PLAと命名された。この方法は作製した動物種が異なる抗体があれば，通常の抗体染色法の延長として組織切片にも適用できるという特徴を有する。私たちはラットとウサギで作った種々の抗体を組み合わせて，既にNa+イオンの取り込みに関わるNhe3とCarbonic anhydrases（CA2a & CA15a）及びアンモニア輸送体Rhcg1が，イオン輸送に特化した塩類細胞膜上で，複合体を作っていることを明らかにした。淡水中で濃度勾配に逆らってイオンを取り込むために，Super transportsomeともいうべき複雑な複合体を形成していることを明らかにした。2. Super transportsomeの機能解析Na+/H+ exchanger（Nhe3）のイオン輸送活性を電気生理学的に測定するのは難しいとされてきたが，私たちはゼブラフィッシュのNhe3bをアフリカツメガエル卵で発現させ電気生理学的に活性を測定することにはじめて成功した。しかも結果は，これまで仮定されていた電気的に中性ではなく，起電性であることを強く示唆した。上記1の結果と合わせると，動物生理学上の長年の課題であった淡水魚のNa+イオンの取り込み問題をほぼ解決したことになる。

1. PLA method for visualization of two kinds of particles in Proximity to the complex in the case of light detection, a new method for the development of proximity ligation assay (PLA) and Duolink PLA This method is applicable to all animal species, and is characterized by the presence of antibodies. The antibody complex was composed of Na+, Nhe3, Carbonic anhydrases (CA2a & CA 15a) and Rhcg1, which was specially designed for Na +, Nhe3, Carbonic anhydrases (CA2a & CA 15a). The concentration of fresh water is mixed with water, and the complex is formed. 2. The function of Super transporter Na+/H+ exchanger (Nhe3) was analyzed and the electrophysiological activity of Na +/H + exchanger was determined successfully. As a result, the electric field is neutral, and the electric field is strong. The results of the above report are as follows: 1. The long-term problem of animal physiology is to solve the problem of Na+ in freshwater fish.