脂質ラフト内に構築された複合トランスポートソームに依存した魚類の淡水適応機構

鱼类的淡水适应机制依赖于脂筏中构建的复杂转运体

• 批准号: 24657053
• 负责人: 星島 一幸
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012-04-01 至 2013-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-24657053/
• 关键词: イオンホメオスタシス; 脂質ラフト; NHE3; 塩類細胞; アンモニア輸送体; Rhcg; トランスポートソーム

1. PLA法によるSuper transportsomeの可視化2種のタンパク質が近接し複合体を作っている場合にのみ蛍光が観察される新しい方法が開発されProximity ligation assay（PLA）ないしはDuolink PLAと命名された。この方法は作製した動物種が異なる抗体があれば，通常の抗体染色法の延長として組織切片にも適用できるという特徴を有する。私たちはラットとウサギで作った種々の抗体を組み合わせて，既にNa+イオンの取り込みに関わるNhe3とCarbonic anhydrases（CA2a & CA15a）及びアンモニア輸送体Rhcg1が，イオン輸送に特化した塩類細胞膜上で，複合体を作っていることを明らかにした。淡水中で濃度勾配に逆らってイオンを取り込むために，Super transportsomeともいうべき複雑な複合体を形成していることを明らかにした。2. Super transportsomeの機能解析Na+/H+ exchanger（Nhe3）のイオン輸送活性を電気生理学的に測定するのは難しいとされてきたが，私たちはゼブラフィッシュのNhe3bをアフリカツメガエル卵で発現させ電気生理学的に活性を測定することにはじめて成功した。しかも結果は，これまで仮定されていた電気的に中性ではなく，起電性であることを強く示唆した。上記1の結果と合わせると，動物生理学上の長年の課題であった淡水魚のNa+イオンの取り込み問題をほぼ解決したことになる。

1. PLA method によるSuper transportsomeのvisualization2kindsのタンパク性がproximity complexを为っているoccasionにのみ蛍光が観看される新しいmethodが开発されProximity ligation assay（PLA）ないしはDuolink PLAとnamedされた.このmethodはProduction of したAnimal species がisoなるantibodies があれば, the usual のantibody staining method of extended として tissue sections にもapplicable できるという特徴を有する. privyたちはラットとウサギで作ったkind々のantibodiesを组み合わせて, both Na+イオンのtake り込みに关わるNhe3とCarbonic anhydrases (CA2a & CA15a) and the びアンモニア transporter Rhcg1が, the イオン transporter specialization した塩 class cell membrane で, the complex っていることを明らかにした. Super transportsomeともいうべきFu雑なcomplexをformationしていることを明らかにした. 2. Function analysis of Super transportsome Na+/H+ exchanger (Nhe3) のイオン transport activity を electron 気 に に す る の は Difficulty し い と さ れ て き た が , private た ち は ゼ ブRakuten The activity of electrophysiology was measured successfully.しかもRESULTは, これまで仮定されていた电気's にneutral ではなく, energizing であることをSTRONG くSHOW した. The result of the above mentioned 1 is a long-term problem in animal physiology, and the problem of freshwater fish is solved.