Creaction of artificial endonuclease using DNA-cleavage domain of a novel restriction enzyme

使用新型限制性酶的 DNA 切割结构域创建人工核酸内切酶

• 批准号: 24658077
• 负责人: KITA Keiko
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012-04-01 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-24658077/
• 关键词: 制限酵素; 分子工学; DNA; ドメイン; リンカー; 分子間相互作用; 構造機能相関; 人工酵素; ヌクレアーゼ

Restriction enzymes recognize and cleave DNA at specific site, and are both indispensable tools for gene manipulation and for studying sequence-specific interaction with DNA. Co-crystal structure of EcoT38I reveals several unique features for DNA recognition and catalysis. This study demonstrates that site-directed mutagenesis approach yielded a EcoT38I (GPuGCPyC) variant that preferentially cleaves one of the degenerate sequences (GAGCTC).

限制性内切酶在特定位点识别和切割DNA，是基因操作和研究序列特异性与DNA相互作用不可缺少的工具。EcoT38I的共晶结构揭示了DNA识别和催化的几个独特特征。这项研究表明，定点诱变方法产生了一个EcoT38I （GPuGCPyC）变体，该变体优先切割一个退化序列（GAGCTC）。

项目成果

Molecular engineering of a novel restriction endonuclease for creating new specificity

用于创造新特异性的新型限制性内切酶的分子工程

• 发表时间: 2012
• 作者: 降幡駿介;早川洋一;Yoichi Hayakawa;日置貴大,中村啓悟,喜多恵子;Keiko KITA;Keiko KITA
• 通讯作者: Keiko KITA

Novel structure and reaction mechanism of EcoT38I restriction endonuclease

EcoT38I限制性内切酶的新颖结构和反应机制

• 发表时间: 2012
• 作者: 降幡駿介;早川洋一;Yoichi Hayakawa;日置貴大,中村啓悟,喜多恵子;Keiko KITA;Keiko KITA;Keiko KITA
• 通讯作者: Keiko KITA

DNA認識ドメインへの変異導入による制限酵素EcoT38Iの機能改変

通过在 DNA 识别域中引入突变对限制性内切酶 EcoT38I 进行功能修饰

• 发表时间: 2014
• 作者: 降幡駿介;早川洋一;Yoichi Hayakawa;日置貴大,中村啓悟,喜多恵子
• 通讯作者: 日置貴大,中村啓悟,喜多恵子

Molecular engineering of a novel restriction endonuclease EcoT38I

新型限制性内切酶 EcoT38I 的分子工程

• 发表时间: 2013
• 作者: 降幡駿介;早川洋一;Yoichi Hayakawa;日置貴大,中村啓悟,喜多恵子;Keiko KITA
• 通讯作者: Keiko KITA