ヒト生命萌芽の分子機構の解明～生殖補助医療の向上及び安全性を目指して～

阐明人类生命萌发的分子机制 - 致力于辅助生殖技术的改进和安全 -

• 批准号: 24659741
• 负责人: 高橋 祐司
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: National Research Institute for Child Health and Development
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012-04-01 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-24659741/
• 关键词: 発生・分化; 生殖補助医療; 着床不全モデル; 胚発生メカニズム

着床前期胚発生は、受精、胚性ゲノム活性化、コンパクション、胚盤胞腔の形成、内細胞塊と栄養外胚葉への分化および分化全能性の獲得など、生殖生物学及び再生医学において極めて重要な事象を含む。本研究では、着床前期胚に特異的に発現する新規遺伝子に注目し、着床前期胚の分割停止モデル、あるいは着床不全モデルの作成とその分子生物学的機構の解明を目指す。本年度はsmall hairpin RNA (shRNA) 発現ベクターの導入に当たり、ゲノムにインテグレーションされる位置によって発現効率が変化する（positional effect）ことを避けるため、Recombinase- mediated cassette exchange (RMCE) ターゲッティングシステムを用いた。ICRマウスの2細胞期に電気的に割球融合させて作成した4倍体の胚盤胞（50個）の胚盤胞腔に、B6 129S6のバックグラウンドを持つES細胞（各shRNAベクターの導入につき3クローン以上を採取）を注入し、偽妊娠ICRマウスの子宮内に移植した。生直後に、マウスの尾を用いて、サザンブロットによりshRNAコンストラクトのゲノムへのインテグレーションを確認した。明らかな外表奇形を認めないことを確認し、正常マウスと交配させ、妊孕性を検討した。妊孕性を認めない雌マウスからは未受精卵及び体外受精後の着床前期胚発生、卵巣組織切片に形態学的異常がないか検索する。一方、雄トランスジェニックマウスは、正常雌マウスと交配させ、次世代雌マウスから得られた未受精卵及び体外受精後の着床前期胚発生、卵巣組織切片に形態学的異常がないか検討した。

The important aspects of preimplantation embryo development, fertilization, embryonic activation, embryo development, blastoderm cavity formation, inner cell mass, differentiation of embryonic ectoderm, and acquisition of differentiation totipotency are discussed in the fields of reproductive biology and regenerative medicine. This study is aimed at elucidating the molecular biological mechanisms for the specific development of preimplantation embryos and the mechanisms for their fragmentation and termination. This year, the positive effect of small hairpin RNA (shRNA) discovery on the introduction of small hairpin RNA (shRNA) into the genome was observed, and recombinase-mediated cassette exchange (RMCE) was used. ICR cells at the 2-cell stage were electrically fused to create tetraploid blastoderm cells (50 cells), and B6 - 129-S6 cells were implanted into ES cells (each shRNA was introduced into the blastoderm cells at least 3 times). After the birth, the tail of the virus was used to identify the virus. The appearance of pregnancy is abnormal, and the pregnancy is abnormal. Pregnancy is not recognized until the female has unfertilized eggs and preimplantation embryos after in vitro fertilization, and morphological abnormalities in egg tissue sections are detected. A female, a male, a female, a