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Development of the Methods for Regulated Expression of Transduced Gene in Transkaryotic Gene Therapy

转核基因治疗中转导基因表达调控方法的发展

基本信息

批准号：
01870051
负责人：
ITAKURA Mitsuo
金额：
$ 13.31万
依托单位：
The University of Tokushima (1990-1991)University of Tsukuba (1989)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至 1991
项目状态：
已结题

项目摘要

The principle of controlling gene expression in transkaryotic or somatic cell gene therapy was developped. The practical methods used in this study were as follows : At first recombinant human insulin cDNA constucted in the plasmid of pBMG-Neo was transfected to mouse cultured fibroblasts of L-cells. Among the clones, the one with the highest proinsulin secretion was selected. Then the second recombinant plasmid containing mouse genomic CD8.2 gene in pHEBo was further transfected to this proinsulin producing cell line. This doubly transfected cells produced proinsulin at 3.4x10^<-6> ng/hr/cell. 2x10^6 of this cell line were intraperitoneally transplanted to streptozocininduced diabetic C3H mice. The blood glucose concentrations were remarkably decreased from 430 mg/dl of the pretreatment level to 80 mg/dl at the 30th day after the transplantation. As expected, animals died of hypoglycemia due to the excessive production of proinsulin. To remove the transplanted cells, an immunological safety system using anti-CD8.2 monoclonal antibodywas tested. The administation of this antibody on the 14th day after the transplantation, once a day for 14 days, completely revered the hypoglycemic effects of transplantation, proving the complete removal of transplated cells. Thus we have developed the animal model of somatic cell gene therapy against diabetes, with the immunological safety system eligible to completely remove the transplanted cells.

阐述了体细胞基因治疗中调控基因表达的原理。本研究采用的具体方法如下：首先将构建在pBMG-Neo质粒中的重组人胰岛素cDNA转染到培养的小鼠L-细胞成纤维细胞中。在克隆中，选择具有最高胰岛素原分泌的克隆。然后将含有小鼠基因组CD8.2基因的第二个重组质粒pHEBo进一步转染到该胰岛素原产生细胞系中。这种双重转染的细胞以3.4x104ng<-6>/hr/细胞产生胰岛素原。将2x10^6个该细胞系腹膜内移植到链脲佐菌素诱导的糖尿病C3 H小鼠中。移植后第30天，血糖浓度由术前的430 mg/dl降至80 mg/dl。正如预期的那样，动物死于胰岛素原过量产生引起的低血糖。为了清除移植细胞，我们用抗CD8.2单克隆抗体建立了一种免疫安全系统。在移植后第14天给予该抗体，每天一次，持续14天，完全逆转了移植的低血糖作用，证明了移植细胞的完全去除。因此，我们建立了体细胞基因治疗糖尿病的动物模型，并建立了完全清除移植细胞的免疫安全系统。

项目成果

期刊论文数量（26）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

川上健、広近玲、山岡孝、山下亀次郎、板倉光夫、中内啓光: "トランスカリョ-ティック法による糖尿病の遺伝子治療" 第12回日本分子生物学会年会プログラム・講演要旨集(抄録、平成元年11月29日ー12月2日、仙台). 246-246 (1989)

Ken Kawakami，Rei Hirochika，Takashi Yamaoka，Kamejiro Yamashita，Mitsuo Itakura，Hiromitsu Nakauchi：“跨核方法治疗糖尿病”日本分子生物学会第12届年会议程和摘要（摘要，平成）246-246 (1989)

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Kawakami Y,Yamaoka T,Yamashita K,Itakura M,and Nakauchi H: "Immunological Safety System in Somatic Gene Therapy" (1991)

Kawakami Y、Yamaoka T、Yamashita K、Itakura M 和 Nakauchi H：“体细胞基因治疗中的免疫安全系统”(1991)

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

川上康,山岡孝,山下亀次郎,中内啓光,板倉光夫: "糖尿病マウスのプロインスリン分泌細胞移植によるトランスカリョ-ティック法による遺伝子治療モデル" 日本糖尿病学会雑誌(抄録、平成2年5月23日ー5月25日、第33回日本糖尿病学会総会、東京). 33(Suppl). (1990)

Yasushi Kawakami、Takashi Yamaoka、Kamejiro Yamashita、Hiromitsu Nakauchi、Mitsuo Itakura：“在糖尿病小鼠中使用胰岛素原分泌细胞移植的跨核方法的基因治疗模型”日本糖尿病学会杂志（摘要，1990 年 5 月 23 日）- 5 月 25 日，日本糖尿病学会第 33 届大会，东京）33（增刊）（1990 年）。

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

川上康、山岡孝、山下亀次郎、中内啓光、板倉光夫: "糖尿病マウスのプロインスリン分泌細胞移植によるトランスカリョ-ティック法による遺伝子治療モデル" 日本糖尿病学会雑誌(抄録、平成2年5月23日ー5月25日、第33回日本糖尿病学会総会、東京). 33(Suppl). 232-232 (1990)

Yasushi Kawakami、Takashi Yamaoka、Kamejiro Yamashita、Hiromitsu Nakauchi、Mitsuo Itakura：“在糖尿病小鼠中使用胰岛素原分泌细胞移植的跨核方法的基因治疗模型”日本糖尿病学会杂志（摘要，1990年5月23日）-5月25日，日本糖尿病学会第 33 届大会，东京）33（增刊）（1990 年）。

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

板倉光夫,川上康,山岡孝,中内啓光,山下亀次郎: "プロインスリンを合成分泌する線維芽細胞による糖尿病の遺伝子治療モデル" 日本内分泌学会雑誌(抄録、平成2年5月17日ー5月19日、第63回日本内分学会年次学術集会、大阪). 66(4). (1990)

Mitsuo Itakura、Yasushi Kawakami、Takashi Yamaoka、Hiromitsu Nakauchi、Kamejiro Yamashita：“使用合成和分泌胰岛素原的成纤维细胞治疗糖尿病的基因治疗模型”日本内分泌学会杂志（摘要，1990年5月17日-5月）第19届、第63届年度学术会议日本分会，大阪）66（4）（1990）。