Generation of bladder urothelium sheets consisting of human induced pluripotent stem cell-derived urothelial cells

1)iPS細胞から分化誘導した尿路上皮細胞の至適継代方法の検討を、FFPB3AB4株で分化誘導した尿路上皮細胞を用いて行った。まず初代培養細胞と同様のトリプシン/EDTAを用いて細胞剥離を行ったが、播種数に関わらず生着不良であった。続いてAccutaseを用いて細胞剥離を行ったところ、細胞生着の改善を認め、さらに播種後24時間、培地にY27632を添加することで、より細胞生着は安定するようになった。しかしながら3継代までは問題なく行えたものの、その後にやはり継代困難となった。今後の研究、さらには再生医療への応用に向けて更なる検討が必要と考えられる。2)FFPB3AB4以外の細胞株でも分化誘導が可能かを検討した。FF201B7株を用いて、既報のプロトコルで分化誘導を行うと、FFPB3AB4株と同様にUroplakin、CK13、CK20の発現が免疫染色によって確認でき、FGF10による重層化促進効果も確認できた。さらにはセルカルチャーインサートを用いた分化誘導により、組織学的に重層上皮構造が確認できた。汎用性を高めるため、この分化誘導法が引き続き他の細胞株にも応用できるかを検討していく。

1)iPS細胞から分化誘導した尿路上皮細胞の至適継代方法の検討を、FFPB3AB4株で分化誘導した尿路上皮細胞を用いて行った。まず初代培養細胞と同様のトリプシン/EDTAを用いて細胞剥離を行ったが、播種数に関わらず生着不良であった。続いてAccutaseを用いて細胞剥離を行ったところ、細胞生着の改善を認め、さらに播種後24時間、培地にY27632を添加することで、より細胞生着は安定するようになった。しかしながら3継代までは問題なく行えたものの、その後にやはり継代困難となった。今後の研究、さらには再生医療への応用に向けて更なる検討が必要と考えられる。2)FFPB3AB4以外の細胞株でも分化誘導が可能かを検討した。FF201B7株を用いて、既報のプロトコルで分化誘導を行うと、FFPB3AB4株と同様にUroplakin、CK13、CK20の発現が免疫染色によって確認でき、FGF10による重層化促進効果も確認できた。さらにはセルカルチャーインサートを用いた分化誘導により、組織学的に重層上皮構造が確認できた。汎用性を高めるため、この分化誘導法が引き続き他の細胞株にも応用できるかを検討していく。