Generation of bladder urothelium sheets consisting of human induced pluripotent stem cell-derived urothelial cells

由人诱导多能干细胞衍生的尿路上皮细胞组成的膀胱尿路上皮片的生成

• 批准号: 20K18115
• 负责人: 鈴木 光太郎
• 金额: $ 1.58万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-12-19 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K18115/
• 关键词: 膀胱再建; iPS細胞; 再生医療; 尿路上皮; 膀胱尿路上皮; ヒトiPS細胞; 細胞シート

1)iPS細胞から分化誘導した尿路上皮細胞の至適継代方法の検討を、FFPB3AB4株で分化誘導した尿路上皮細胞を用いて行った。まず初代培養細胞と同様のトリプシン/EDTAを用いて細胞剥離を行ったが、播種数に関わらず生着不良であった。続いてAccutaseを用いて細胞剥離を行ったところ、細胞生着の改善を認め、さらに播種後24時間、培地にY27632を添加することで、より細胞生着は安定するようになった。しかしながら3継代までは問題なく行えたものの、その後にやはり継代困難となった。今後の研究、さらには再生医療への応用に向けて更なる検討が必要と考えられる。2)FFPB3AB4以外の細胞株でも分化誘導が可能かを検討した。FF201B7株を用いて、既報のプロトコルで分化誘導を行うと、FFPB3AB4株と同様にUroplakin、CK13、CK20の発現が免疫染色によって確認でき、FGF10による重層化促進効果も確認できた。さらにはセルカルチャーインサートを用いた分化誘導により、組織学的に重層上皮構造が確認できた。汎用性を高めるため、この分化誘導法が引き続き他の細胞株にも応用できるかを検討していく。

1)iPS cell differentiation induction and appropriate urothelial cell culture methods, FFPB3AB 4 strain differentiation induction and urothelial cell culture. The primary culture cells were cultured in the same way as the cells cultured in the same way. Accutase is used to remove cells, improve cell growth, add Y27632 to culture 24 hours after sowing, and stabilize cell growth. The problem is that there are three generations of problems, and there are three generations of difficulties. Future research and application of regenerative medicine should be reviewed. 2) It is possible to induce differentiation in cell lines other than FFPB3AB4. FF201B7 strain was used in the treatment of Uroplakin, CK13 and CK20, and FGF10 strain was used in the treatment of Uroplakin, CK13 and CK20. In addition, the differentiation and histological structure of stratified epithelium were confirmed. The method of inducing differentiation of the cell lines with universal sex is introduced.

项目成果

ヒトiPS細胞を用いた膀胱尿路上皮細胞の分化誘導と膀胱再建

膀胱尿路上皮细胞的分化诱导和利用人 iPS 细胞的膀胱重建

• 发表时间: 2020
• 作者: 鈴木光太郎