緑茶カテキン類による細胞融合と破骨細胞分化制御機構の解明

本年度はエピガロカテキンガレート(EGCg)による細胞融合に関わる因子を特定することを目指し，遺伝子発現解析および細胞の融合，機能に焦点を当てて実験を行った。破骨前駆細胞であるRAW264.7細胞にEGCgを添加し，多核化が亢進した細胞群における遺伝子発現を解析した。比較対象として薬剤未処理群あるいは破骨細胞への分化誘導を行ったRANKL/M-CSF添加群を用いた。細胞を培養用プレートに播種しα-MEM培地中で3日間培養後，RNAを抽出し遺伝子発現解析に供した。細胞融合についてはギムザ染色，蛍光顕微鏡下での核やアクチンリングの可視化を行い評価した。破骨細胞分化についてはTRAP染色，TRAP活性測定を行い評価した。マイクロアレイによる解析，およびリアルタイムPCRにより遺伝子発現の定量を行った結果，未処理群と比較しEGCg添加群は刺激・ストレス応答関連因子の発現上昇が認められた。実施計画ではタンパク質レベルでの評価を中心に行う予定であったが，細胞レベルでの応答や細胞の形態の評価の重要性が増した。一連の解析から選別した候補因子について細胞の多核化・融合に対する影響の検討を行い，細胞融合に関与しているかどうかを評価した。また，外的環境条件の違いによる細胞融合への影響の比較，それらの応答が破骨細胞分化とは異なる経路で起こっているかどうかを検討した。本研究の目的であるEGCg添加による細胞融合に関与する因子の特定は概ね進めることができたため，論文投稿および学会発表の準備を行っている。

本年度はエピガロカテキンガレート(EGCg)による細胞融合に関わる因子を特定することを目指し，遺伝子発現解析および細胞の融合，機能に焦点を当てて実験を行った。破骨前駆細胞であるRAW264.7細胞にEGCgを添加し，多核化が亢進した細胞群における遺伝子発現を解析した。比較対象として薬剤未処理群あるいは破骨細胞への分化誘導を行ったRANKL/M-CSF添加群を用いた。細胞を培養用プレートに播種しα-MEM培地中で3日間培養後，RNAを抽出し遺伝子発現解析に供した。細胞融合についてはギムザ染色，蛍光顕微鏡下での核やアクチンリングの可視化を行い評価した。破骨細胞分化についてはTRAP染色，TRAP活性測定を行い評価した。マイクロアレイによる解析，およびリアルタイムPCRにより遺伝子発現の定量を行った結果，未処理群と比較しEGCg添加群は刺激・ストレス応答関連因子の発現上昇が認められた。実施計画ではタンパク質レベルでの評価を中心に行う予定であったが，細胞レベルでの応答や細胞の形態の評価の重要性が増した。一連の解析から選別した候補因子について細胞の多核化・融合に対する影響の検討を行い，細胞融合に関与しているかどうかを評価した。また，外的環境条件の違いによる細胞融合への影響の比較，それらの応答が破骨細胞分化とは異なる経路で起こっているかどうかを検討した。本研究の目的であるEGCg添加による細胞融合に関与する因子の特定は概ね進めることができたため，論文投稿および学会発表の準備を行っている。