破骨細胞融合時の自他認識機構

破骨细胞融合过程中的自我-他人识别机制

• 批准号: 19659387
• 负责人: 滝戸 次郎
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19659387/
• 关键词: 細胞融合; 細胞間認識; 破骨細胞; アクチン

前年度までに、破骨細胞融合時に出現する新規アクチン巨大構造体の構成タンパク質を明らかにしたので、本年度は、その生成機構および機能の解明を進めた。アクチン巨大構造体には、Nonmuscle myosin IIAが含まれていたので、RAW264.7細胞へ同分子のsiRNAを導入し、その後RANKLで刺激し破骨細胞分化を誘導する系でその機能を検討した。Myosinは、アクチンとの相互作用により張力を発生することが知られているので、融合時に大きな張力の必要性が求められていると仮定した。しかし、siRNAを導入しても融合反応は進行し正常な多核細胞が形成された。唯一の表現型の違いは、形成された多核細胞がより大きくなった点である。この結果から、融合時のアクチン構造体にmyosin IIAは局在するものの、機能的には必須の分子ではなく、その機能は分化終了後に形成されるアクチンリングを介した破骨細胞の構造維持に関与すると推測された。同様にアクチン構造体に共局在するE-cadherin, Arp2/3の機能についても、siRNAを用い検討したが、融合反応に特異的な変化は観察されなかった。一方、アクチン脱重合阻害剤Jasplakinolide添加あるいは、培養液中のカルシウム濃度を低下させると、融合反応が停止することから、RAW264.7細胞においてはアクチンの重合、脱重合サイクルは融合に必須であることは判明したが、その制御機構には未知の分子が関与すると考えられた。アクチン重合調節因子として、Rac1, Cdc42, RhoAの細胞内分布を蛍光抗体法で検討した。また、これらの因子に対する各種阻害剤を用いて融合阻害を検討したが、いずれの因子についても関与の可能性は確認されなかった。今後、アクチン繊維の構造変化に関与する新たな分子の探索が必要と考えられた。

In the past year, new rules have been introduced for the composition of giant structures when osteoclasts fuse, and in the current year, new rules have been introduced for the generation mechanism and function of giant structures. To investigate the function of RAW264.7 cells transfected with siRNA containing Nonmuscle myosin IIA and RANKL to stimulate osteoclast differentiation. Myosin is the key to understanding the tension in the interaction between myosin and myosin. The fusion reaction proceeds after siRNA is introduced and normal multinucleated cells are formed. The only phenotype is the formation of multinucleated cells. As a result, myosin IIA is essential for the development and function of osteoclasts. The same construct was used in the functional analysis of E-cadherin, Arp2/3, siRNA, fusion, and anti-fusion. The addition of Jasplakinolide to RAW264.7 cells resulted in a decrease in the concentration of protein in the culture medium and a cessation of fusion. The intracellular distribution of regulatory factors Rac1, Cdc42, RhoA was investigated by light antibody method. For example, if a factor is used in a fusion, the probability of the factor is determined. In the future, it is necessary to explore the relationship between structural transformation and new molecules.