環境水を用いた非侵襲的な魚病検査手法の確立

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昨今、養殖場では様々な魚病が頻発し、生産効率や商品価値を著しく低下させている。魚病被害抑制のためには、密な検査により魚病発生を早期に探知し、発生拡大の前に封じ込め・治療を行うことが不可欠であるが、現行の検査方法は取り上げや解剖による魚体へのダメージから養殖業者に敬遠されている。そこで本研究では環境水をサンプルとした、魚体の取り上げを必要としない非侵襲的な魚病検査手法を確立することを目的とする。昨年度、マダイに対する魚病細菌Edwardsiella anguillarumの感染試験を行い、飼育水中のマダイ由来RNAの網羅的検出を行ったところ、複数のRNAが非感染魚飼育水に比べ有意に増加していた。また、これらのうち3つのRNAを選定し定量PCR法による定量検出系を確立し、飼育水中の当該RNAの発現動態を調べたところ、対象としたいずれのRNAも感染魚飼育水中で非感染魚飼育水に比べ数十～数百倍高く発現しており、またRNAの種類により発現パターンが異なっていた。そこで本年度は、再度マダイに対するE.anguillarumの感染試験を行い、確立した飼育水中のRNA定量系について再現性・妥当性を確認したところ、確立した3つのRNAはいずれも昨年度と同様の発現動態を示し、再現性が確認された。また、これらのRNAは実際の養殖場の飼育水からも検出可能であったことから、これらが病原体の感染を探知できる非侵襲性マーカーとして魚病検査に応用できる可能性が示唆された。さらに、選定されたRNAの一部については、市販の検査キットを用いた関連タンパク質の飼育水中の活性測定系を確立した。