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環境水を用いた非侵襲的な魚病検査手法の確立

利用环境水体进行非侵入性鱼病检测方法的建立

基本信息

批准号：
21K14901
负责人：
竹内久登
金额：
$ 3万
依托单位：
Ehime University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K14901/
关键词：
養殖魚病感染症対策マダイエドワジエラ症非侵襲検査 RNA

项目摘要

昨今、養殖場では様々な魚病が頻発し、生産効率や商品価値を著しく低下させている。魚病被害抑制のためには、密な検査により魚病発生を早期に探知し、発生拡大の前に封じ込め・治療を行うことが不可欠であるが、現行の検査方法は取り上げや解剖による魚体へのダメージから養殖業者に敬遠されている。そこで本研究では環境水をサンプルとした、魚体の取り上げを必要としない非侵襲的な魚病検査手法を確立することを目的とする。昨年度、マダイに対する魚病細菌Edwardsiella anguillarumの感染試験を行い、飼育水中のマダイ由来RNAの網羅的検出を行ったところ、複数のRNAが非感染魚飼育水に比べ有意に増加していた。また、これらのうち3つのRNAを選定し定量PCR法による定量検出系を確立し、飼育水中の当該RNAの発現動態を調べたところ、対象としたいずれのRNAも感染魚飼育水中で非感染魚飼育水に比べ数十～数百倍高く発現しており、またRNAの種類により発現パターンが異なっていた。そこで本年度は、再度マダイに対するE.anguillarumの感染試験を行い、確立した飼育水中のRNA定量系について再現性・妥当性を確認したところ、確立した3つのRNAはいずれも昨年度と同様の発現動態を示し、再現性が確認された。また、これらのRNAは実際の養殖場の飼育水からも検出可能であったことから、これらが病原体の感染を探知できる非侵襲性マーカーとして魚病検査に応用できる可能性が示唆された。さらに、選定されたRNAの一部については、市販の検査キットを用いた関連タンパク質の飼育水中の活性測定系を確立した。

Today, fish farms are suffering from frequent disease, productivity and commodity prices are falling. Fish disease inhibition and close detection, fish disease development, early detection, development of large before the closure of treatment, the current detection methods are based on the anatomy of fish body, fish body and fish culture industry protection. This study aims to establish a method for detecting fish diseases in the environment and in the selection of fish. In the past year, the infection test of Edwardsiella anguillarum was carried out, and the detection of RNA in the breeding water was carried out. In addition, the quantitative detection system for the selected RNA by quantitative PCR was established, and the detection dynamics of the RNA in the breeding water were adjusted. The RNA in the infected fish breeding water was tens to hundreds of times higher than that in the non-infected fish breeding water. However, the types of RNA detected were different. This year, the infection test of E.anguillarum was carried out again, and the reproducibility of RNA quantification system in breeding water was confirmed. The possibility of detection of pathogen infection in aquaculture water is demonstrated by the presence of RNA in fish. A part of the RNA was selected and the activity assay system was established in the culture water.