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卵子型エピゲノム形成におけるH3K36メチル化酵素ファミリーの機能解明

H3K36 甲基转移酶家族在卵母细胞型表观基因组形成中的功能阐明

基本信息

批准号：
21K15000
负责人：
佐々木恵亮
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K15000/
关键词：
卵エピジェネティクスヒストン修飾ゲノム編集卵子 microRNA RNA干渉

项目摘要

H3K36メチル化酵素遺伝子の冗長性を検証するための卵特異的多重ノックダウンマウスは現在作成中である。これまではゲノム編集によって卵特異的に発現する遺伝子のイントロンに人工的に配列をデザインしたマイクロRNA様配列（amiRNA）をノックインする戦略をとっていたが、遺伝子ノックダウン効率に問題が生じる可能性が考えられた。現在はamiRNAのコピー数を増加させてより強力なサイレンシング効果を得るという意図のもと、卵特異的にamiRNAを発現可能なベクター系を構築し、これを用いたトランスジェニックマウスを作成している。H3K36メチル化酵素遺伝子を欠失させた単一遺伝子のノックアウトマウス作出にも着手した。まずは遺伝子欠損による致死性の報告がないNsd3のノックアウトマウスを作成し、複数ラインのノックアウトマウスが樹立できた。現在は交配によりホモノックアウトを作成中である。Nsd1、Nsd2およびSetd2については卵特異的に遺伝子阻害をする必要があるため、コンディショナルノックアウトかamiRNAによる卵特異的ノックダウンのいずれかを検討している。また、本研究ではCUT&RUNによるヒストン修飾の全ゲノムプロファイルを実施する予定であったが、CUT&RUNよりもローインプットなCUT&Tag法に切り替えた。ライブラリ調製にあたっては、常法を改変して細胞吸着磁気ビーズフリーかつ成長完了卵に適したプロトコルを確立できた。野生型マウス卵を用いてヒストンH3における36番目のリジン残基のトリメチル化（H3K36me3）およびH3K27me3修飾について、現在シークエンス解析中である。

The H3K36 enzyme enzyme gene is long and long, and the multiple genes of the egg are now in the process of being made. On the basis of the data in the editing set, you will find that the artificial configuration (amiRNA) is related to the possibility that there is a significant increase in the rate of health. Now, in the amiRNA system, you can make sure that you have a problem, and that you may be able to use the special amiRNA to make sure that you have a problem. H3K36, enzyme, enzyme and enzyme. The report of the lethality report, the Nsd3 report, the report of the fatality report, the report of the fatality report, the report of the lethality report, the report of the fatality report, the report of the fatality report. Now the mating team is in the process of mating. Nsd1, Nsd2