ハブ咬傷治療薬開発を目指した筋壊死因子標的型高親和性Fabの創製

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毒蛇ハブ咬傷治療に用いられる抗毒素は出血などの症状に効果を発揮し、迅速かつ適切な投与により、ハブ咬傷被害で死亡する例は稀になっている。しかし、筋壊死の症状を抑える効果が低いために運動障害などの後遺症が残り、咬傷患者のQOL低下につながるケースもある。そのため、筋壊死抑制効果がより高い抗毒素に加え、ハブ毒の筋壊死誘導メカニズムの解明が求められている。当研究室ではこのような状況を踏まえ、ハブ毒筋壊死因子BPIIを標的としたモノクローナル抗体を取得し、これを咬傷治療およびBPIIの筋壊死誘導メカニズム解明のツールとして用いることを目指して物性解析と改変を行っている。本研究課題は抗BPII抗体の高機能化の一環として、BPIIに対する結合親和性を高めることを目的としている。軽鎖フレームワーク領域（FR）への塩基性アミノ酸導入により酸性蛋白質に対する結合親和性が改善したという報告を参考に変異体デザインを行うこととした。すなわち、本研究課題の抗原BPIIは塩基性蛋白質であることから、抗体フラグメントFabのFRへの酸性アミノ酸（アスパラギン酸、グルタミン酸）導入による親和性改善を試みることとした。今年度は、軽鎖FRのセリン（中性アミノ酸）をアスパラギン酸とグルタミン酸に置換した抗BPII Fab変異体の調製とBPIIとの相互作用解析を行った結果、当初の予想に反し、アスパラギン酸導入により結合親和性が低下し、グルタミン酸導入ではほとんど変化が見られなかった。