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multi scale 3D structural analysis of SASRS-CoV-2 infected cells by electronmicroscopy

通过电子显微镜对 SASRS-CoV-2 感染细胞进行多尺度 3D 结构分析

基本信息

批准号：
21K15450
负责人：
平林愛
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

BSL3実験施設にてVero E6/ TMPRSS2細胞にSARS-CoV-2を感染させ、感染24時間でアルデヒドによる固定を行い、電子顕微鏡解析用の試料作製を行なった。30 nm, 120枚の超薄連続切片をアレイトモグラフィー法を用いて解析した。アレイトモグラフィーは連続切片を用いて解析を行うため、細胞全体の連続撮影を行ない、3次元的に感染細胞全体を観察し、その中で、興味深い視野について再度、倍率をあげて、撮影することが可能である。そこで、これまで詳細が明らかにされていない、新しく形成された子孫ウイルス粒子がどのように輸送され、細胞外へ出ていくか、その過程についての解析を試みた。感染細胞の広範囲を3次元で高分解能解析することにより、子孫ウイルス粒子がどこでどのように出芽し、どのような小胞で輸送されているのかを明らかにすることができた。さらに、ウイルス粒子が形質膜外へ放出される瞬間を捉えることに成功し、さまざまな形態でエクソサイトーシスすることで粒子が細胞外へ放出されることを明らかにした。その際に輸送小胞にの電子密度の高い膜構造が認められることがわかり、それについてさらに高分解能で解析するために、電子線トモグラフィーを行なった。再構築後、約0.6nmのスライス像を観察したところ、被覆ピットが付着していることを見出した。

During the BSL3 implementation, SARS-CoV-2 was infected in Vero E6/TMPRSS2 cells, fixed in place for 24 hours of infection, and samples were prepared for electron microscopy analysis. 30 nm, 120 pieces of ultra-thin continuous sections were analyzed by using the method. For example, if you want to use a slice, you can analyze it, and if you want to use a slice, you can use a slice to analyze it. If For example, in order to analyze the process of particle transport, extracellular transport, new particle formation, particle transport, particle transport. The infected cells have a three-dimensional high decomposition energy analysis, and their descendants have a high decomposition energy analysis. The particles are released from the plasma membrane in a timely manner. The electron density of the transport cell is high, and the electron density of the transport cell is high. After the construction, about 0.6 nm of the image is observed, and the coating is observed.