IL-33/ST2を介した川崎病および冠動脈病変発症機序の解明

阐明IL-33/ST2介导的川崎病和冠状动脉病变的发病机制

• 批准号: 21K15906
• 负责人: 岡田 清吾
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K15906/
• 关键词: 川崎病; alarmin; DAMPs; IL-33; 冠動脈病変; IL-33/ST2; 自然免疫

培養ヒト冠動脈内皮細胞（HCAEC）をLonza社から入手し、endothelial cell growth medium-2（EGM-2） BulletKit（Lonza）を用いて湿度5%CO2、37℃の条件下で培養した。HCAECを24ウェルプレートに播種し（4.0×10^4 cells/well）24時間培養した後、pH7.0 のN-（2-hydroxyethyl）piperazine-N'-ethanesulfonic acid（HEPES）緩衝液で一度洗浄した。HCAECを1、10、100 ng/mL濃度のIL-33（R&D Systems）で刺激し、刺激後0、4、12、24 時間後の細胞培養上清および細胞を回収した。また同様の実験をIL-33およびTNF-αの共刺激で行い上清および細胞を回収・保存した。後日保存上清をEnzyme-linked immuno-sorbent assay（ELISA）法で解析した。IL－33刺激濃度依存性に培養HCAEC上清中の可溶性ST2、IL－6、IL－8、およびmonocyte chemoattractant protein－1濃度が上昇した。IL－33とTNF－αの共刺激では、IL－33単独刺激に比して上清中炎症性サイトカイン濃度が高値を示した。また、IL－33単独刺激時の培養HCAEC上清中IL－6濃度は、TNF－α単独刺激時に比し有意に高値であった。

Culturing coronary artery endothelial cells (HCAEC) was started at Lonza and cultured under conditions of humidity 5% CO2 and 37℃ using the endothelial cell growth medium-2 (EGM-2) Bulletin Kit (Lonza). HCAEC was seeded at 24 ° C (4.0×10^4 cells/well) for 24 hours and washed once in N-(2-hydroxyethyl) piperazine-N'-ethanesulfonic acid (HEPES) buffer at pH 7.0. IL-33 (R&D Systems) at concentrations of 1, 10, and 100 ng/mL for HCAEC stimulation, cell culture supernatant, and cell recovery at 0, 4, 12, and 24 hours after stimulation. The co-stimulation of IL-33 and TNF-α in the supernatant and the recovery of cells were also studied. The supernatant was analyzed by Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). IL-33 stimulated concentration-dependently the concentrations of soluble ST-2, IL-6, IL-8 and monocyte chemoattractant protein-1 in supernatant of cultured HCAEC increased. IL-33 and TNF-α co-stimulation, IL-33 alone stimulation of inflammatory cells in the supernatant increased significantly. IL-6 concentrations in supernatant of cultured HCAECs stimulated by IL-33 alone were significantly higher than those stimulated by TNF-α alone.