IL-33/ST2を介した川崎病および冠動脈病変発症機序の解明

培養ヒト冠動脈内皮細胞（HCAEC）をLonza社から入手し、endothelial cell growth medium-2（EGM-2） BulletKit（Lonza）を用いて湿度5%CO2、37℃の条件下で培養した。HCAECを24ウェルプレートに播種し（4.0×10^4 cells/well）24時間培養した後、pH7.0 のN-（2-hydroxyethyl）piperazine-N'-ethanesulfonic acid（HEPES）緩衝液で一度洗浄した。HCAECを1、10、100 ng/mL濃度のIL-33（R&D Systems）で刺激し、刺激後0、4、12、24 時間後の細胞培養上清および細胞を回収した。また同様の実験をIL-33およびTNF-αの共刺激で行い上清および細胞を回収・保存した。後日保存上清をEnzyme-linked immuno-sorbent assay（ELISA）法で解析した。IL－33刺激濃度依存性に培養HCAEC上清中の可溶性ST2、IL－6、IL－8、およびmonocyte chemoattractant protein－1濃度が上昇した。IL－33とTNF－αの共刺激では、IL－33単独刺激に比して上清中炎症性サイトカイン濃度が高値を示した。また、IL－33単独刺激時の培養HCAEC上清中IL－6濃度は、TNF－α単独刺激時に比し有意に高値であった。

培養ヒト冠動脈内皮細胞（HCAEC）をLonza社から入手し、endothelial cell growth medium-2（EGM-2） BulletKit（Lonza）を用いて湿度5%CO2、37℃の条件下で培養した。HCAECを24ウェルプレートに播種し（4.0×10^4 cells/well）24時間培養した後、pH7.0 のN-（2-hydroxyethyl）piperazine-N'-ethanesulfonic acid（HEPES）緩衝液で一度洗浄した。HCAECを1、10、100 ng/mL濃度のIL-33（R&D Systems）で刺激し、刺激後0、4、12、24 時間後の細胞培養上清および細胞を回収した。また同様の実験をIL-33およびTNF-αの共刺激で行い上清および細胞を回収・保存した。後日保存上清をEnzyme-linked immuno-sorbent assay（ELISA）法で解析した。IL－33刺激濃度依存性に培養HCAEC上清中の可溶性ST2、IL－6、IL－8、およびmonocyte chemoattractant protein－1濃度が上昇した。IL－33とTNF－αの共刺激では、IL－33単独刺激に比して上清中炎症性サイトカイン濃度が高値を示した。また、IL－33単独刺激時の培養HCAEC上清中IL－6濃度は、TNF－α単独刺激時に比し有意に高値であった。