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寄生虫由来の宿主コミュニケーション因子血中循環核酸の網羅的同定と診断利用

源自寄生虫的宿主通讯因素：循环核酸的综合识别和诊断用途

基本信息

批准号：
21K16325
负责人：
入江隆夫
金额：
$ 2.91万
依托单位：
University of Miyazaki
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K16325/
关键词：
血中循環核酸エキノコックス肺吸虫診断系診断

项目摘要

エキノコックスに関しては、WGSにより得られた候補配列についてリアルタイムPCRによる検出系の検討を昨年度から継続した。多包条虫ゲノムにマッピングされたリードの遺伝子領域として特定されたものとして、タンデムリピート構造の知られるU1 snRNA領域のほか、ミトコンドリアに由来するコピー数の多い領域が複数見られた。また、血清学的診断にも用いられる特異的タンパク質をコードするDNAなども見られた。今年度はこれらについてリアルタイムPCRの検出系を評価したものの、結果としては、現時点で最良のものは、昨年度に試行した領域であり、感染早期の検体での検出感度が８割にとどまってしまっている。そのため、現時点では感染期間を通じて確実に検出可能となる系の確立には至っていない。次年度、残り数候補について評価を行い、その時点での最良のものを決定し、ヒトの検体での検討に移行したいと考えている。肺吸虫については、人獣共通寄生虫である宮崎肺吸虫メタセルカリアを得て、ラットへの感染実験を行った。虫体が十分に成熟後、採血を行い、ccfDNAを抽出、WGSによる配列の網羅的同定を行った。しかしながら、各検体約500万リードのccfDNAの中から、宮崎肺吸虫特異的な配列は得られなかった。原因としてラットにおける成虫の定着率の低さ（約１割程度）があると考え、現在、人獣共通寄生種ではないがラットを好適な終宿主とする大平肺吸虫での再検討を進めている。既に採材まで完了し、今後ショットガンシークエンスへと進む予定である。なお、大平肺吸虫の感染実験では、投与した幼虫の約半数が成虫へと発育していることが確認できているため、肺吸虫由来の循環核酸の検出が期待できる状況である。

WGS is the first time that a candidate has been selected for PCR. The multi-packet worm must be able to identify the number of U1 snRNA domains and the number of U1 snRNA domains in the multi-packet worm. Serological diagnosis is based on DNA analysis. This year, the detection system of PCR was evaluated, the results were evaluated, the current point was the best, the previous year was tested, the detection sensitivity of early infection was evaluated, and the results were evaluated. The time period of infection is determined by the probability of infection. The next year, the number of candidates, the evaluation, the time, the best choice, the selection, the selection. Paragonimus miyazaki common parasite infection After the insect is fully mature, the blood is collected, the ccfDNA is extracted, and the WGS is matched. About 5 million ccfDNA samples were collected from each sample. Paragonimus miyazaki-specific sequences were collected. The reason for this is that the adult fixation rate is low (about 1 cut). Now, the common parasitic species between humans and humans can serve as a suitable final host. The re-examination of Paragonimus dapingensis is ongoing. Since the acquisition of materials has been completed, the future development of the project will be determined. About half of the larvae infected with Paragonimus megaponimus were found to have developed into adults. The detection of circulating nucleic acids from Paragonimus megaponimus was expected.