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Host virus interaction in viral endothelial cell necrosis of eel (VECNE)

鳗鱼病毒性内皮细胞坏死 (VECNE) 中宿主病毒的相互作用

基本信息

批准号：
22K14953
负责人：
梅田剛佑
金额：
$ 3万
依托单位：
Fisheries Research and Education Agency
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

ウナギのウイルス性血管内皮壊死症は、Japanese eel endothelial cells-infecting virus (JEECV)と呼ばれるウイルスを原因とする疾病であり、病魚は鰓や肝臓、腎臓など全身に出血・鬱血を生じ、重症時には死亡する。養鰻において被害額の大きい本病であるが、根本的対策はこれまで確立されていない。本研究ではJEECVに対するワクチンの開発を見据え、ウイルスを容易かつ低コストで培養する方法の開発を試みるとともに、JEECVによるウナギの細胞への感染機構の解明を目指す。初年度である当該年度は、主にウナギの血管内皮細胞の培養と、これを宿主としたJEECVの培養とを試みた。ウナギから心臓動脈球を摘出、細胞分散処理を行ったのちに培養を継続した結果、この組織から株化細胞を作出することに成功した。この培養細胞は血管内皮細胞の特徴であるDil標識アセチルLDLの取り込み能を示し、現在約30継代目まで培養を継続している。この細胞を温度別に培養したところ、増殖は30℃と25℃で早かったが35℃ではやや遅く、37℃ではほとんど見られなかった。また、この細胞に対して血管内皮壊死症病魚の鰓磨砕液濾液を添加したところ、4～7日後に、核の肥大や細胞の剥離といった細胞変性効果（CPE）が見られた。ウイルス液添加後に温度別に培養し、qPCRにより培養上清中のウイルスDNA量を測定したところ、ウイルスDNAの増加は25℃で最も早く、次が30℃で、35℃では増加はほとんど認められなかった。培養ウイルス液をウナギに腹腔接種した感染試験では18日間で30%のウナギが死亡し、症状を呈した個体も見られ、死亡魚からは本ウイルスが検出された。次年度は、当該年度に開発したウナギ血管内皮細胞およびJEECVの培養法を用い、ウナギおよびウイルスのトランスクリプトーム解析を実施予定である。

Japanese eel endothelial cells-infecting virus (JEECV) is a common cause of vascular endothelial cell death. The basic strategy for this disease is to establish the disease. This study provides evidence for the development of JEECV-related cells, and provides guidance for the development of methods for easy and low-cost culture of JEECV-related cells and the understanding of infection mechanisms. In the beginning of the year, the host cells were cultured and the host cells were cultured. The results of cell culture and tissue culture were successful. These cultured cells are characterized by vascular endothelial cells and are now cultured for about 30 generations. The cells were cultured at 30 ℃, 25 ℃ and 37℃ respectively. After 4~7 days, the cells were removed from the infected fish and the CPE was observed. After the addition of the culture medium, the amount of DNA in the culture supernatant was determined at 25℃, and the amount of DNA in the culture supernatant was determined at 30℃. The culture medium was inoculated intraperitoneally and 30% of them died during the day. In the following year, the development of vascular endothelial cells and JEECV culture method was carried out.