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Host virus interaction in viral endothelial cell necrosis of eel (VECNE)

鳗鱼病毒性内皮细胞坏死 (VECNE) 中宿主病毒的相互作用

基本信息

批准号：
22K14953
负责人：
梅田剛佑
金额：
$ 3万
依托单位：
Fisheries Research and Education Agency
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

ウナギのウイルス性血管内皮壊死症は、Japanese eel endothelial cells-infecting virus (JEECV)と呼ばれるウイルスを原因とする疾病であり、病魚は鰓や肝臓、腎臓など全身に出血・鬱血を生じ、重症時には死亡する。養鰻において被害額の大きい本病であるが、根本的対策はこれまで確立されていない。本研究ではJEECVに対するワクチンの開発を見据え、ウイルスを容易かつ低コストで培養する方法の開発を試みるとともに、JEECVによるウナギの細胞への感染機構の解明を目指す。初年度である当該年度は、主にウナギの血管内皮細胞の培養と、これを宿主としたJEECVの培養とを試みた。ウナギから心臓動脈球を摘出、細胞分散処理を行ったのちに培養を継続した結果、この組織から株化細胞を作出することに成功した。この培養細胞は血管内皮細胞の特徴であるDil標識アセチルLDLの取り込み能を示し、現在約30継代目まで培養を継続している。この細胞を温度別に培養したところ、増殖は30℃と25℃で早かったが35℃ではやや遅く、37℃ではほとんど見られなかった。また、この細胞に対して血管内皮壊死症病魚の鰓磨砕液濾液を添加したところ、4～7日後に、核の肥大や細胞の剥離といった細胞変性効果（CPE）が見られた。ウイルス液添加後に温度別に培養し、qPCRにより培養上清中のウイルスDNA量を測定したところ、ウイルスDNAの増加は25℃で最も早く、次が30℃で、35℃では増加はほとんど認められなかった。培養ウイルス液をウナギに腹腔接種した感染試験では18日間で30%のウナギが死亡し、症状を呈した個体も見られ、死亡魚からは本ウイルスが検出された。次年度は、当該年度に開発したウナギ血管内皮細胞およびJEECVの培養法を用い、ウナギおよびウイルスのトランスクリプトーム解析を実施予定である。

Japanese eel endothelial cells-infecting virus (JEECV) Causes of disease include disease, liver disease, kidney disease, systemic bleeding, blood stasis, and death in severe cases. The main disease caused by raising eels is a large amount, and the basic policy is established. This study is based on JEECV's easy-to-understand and low-level cultivation methods.るmethodの开発をtrialみるとともに、JEECVによるウナギのcell へのInfection mechanismの解明を目す. In the first year, the culture of the host vascular endothelial cells will be carried out in that year, and the culture of the host JEECV will be tested. The arterial bulb of the heart was removed and the cells were dispersed and cultured. The result was successful, and the tissue cultured cells were successfully produced. The cultured cells and vascular endothelial cells are labeled with the DIL label of LDL, and are now about 30 years old. The cells are cultured at different temperatures and propagated at 30℃ and 25℃.ったが35℃ではやや遅く、37℃ではほとんど见られなかった.また, このcell に対して Vascular endothelial death disease fish gill grinding liquid filtrate を added したところ, 4 ~After 7 days, the exfoliation of hypertrophic cells and the cell-enhancing effect (CPE) of the nucleus will be seen. After the addition of the ウイルス solution, the temperature was determined and the amount of DNA in the culture supernatant was measured using qPCR.ウイルスDNAのincreasing and adding 25℃ is the best early もく, times is 30℃ で, 35℃ is では嗗adding められなかった. Cultured ウイルス solution をウナギにIntraperitoneal inoculationしたInfection test験では18 daysで30%のウナギがDeathし、Symptoms をappearsしたIndividual も见られ、Death fish からは本ウイルスが検出された. In the following year, the JEECV culture method for vascular endothelial cells will be developed in that year.を用い、ウナギおよびウイルスのトランスクリプトームANALYSIS を実士出定である.