オルガネラへの脂質分配と細胞分裂を調和させる分子機構の解明

リン脂質ホスファチジルコリン（PC）は哺乳類細胞において主要な膜構成脂質であり、主には小胞体・ゴルジ体で生合成され、ミトコンドリアや細胞膜などの他のオルガネラ膜に運ばれる。細胞増殖・分裂の過程でオルガネラ膜にPCが正しく分配される機構を明らかにするために、本年度は、クリックケミストリーとフローサイトメトリーを利用して、ミトコンドリアへのPC輸送に関するスクリーニング検討を実施した。アジド基を導入したコリンを出発物質として生合成されるアジド含有PCの細胞内分布について、小胞体・ゴルジ体について蛍光標識し、同時に、別の蛍光波長で、ミトコンドリアについて標識した細胞について検討した。ゲノムスケールCRISPR-KOライブラリーを発現するK562細胞のプールから、小胞体・ゴルジ体のPC量に対してミトコンドリアPC量が減少した変異細胞をフローサイトメトリーにより選抜した。次世代シーケンサーによる解析および個別の遺伝子のCRISPR-KOの再解析を通じて、スクリーニングの表現型を示す遺伝子を同定した。解析の結果、リン脂質を細胞内で輸送することが知られるSTARD7が得られ、STARD7を欠損する細胞では、小胞体・ゴルジ体のPC量に対してミトコンドリアPC量が顕著に減少していることを実際に検出した。また、これと同様の表現型を示すものとして、PELOも同定した。PELOはミトファジーに関わることが知られており、さらにPELO欠損K562細胞は細胞増殖に遅延が認められた。この事より、ミトコンドリアへのPC分配と細胞増殖のバランス維持にPELOが関与する可能性が示唆された。

リン脂質ホスファチジルコリン（PC）は哺乳類細胞において主要な膜構成脂質であり、主には小胞体・ゴルジ体で生合成され、ミトコンドリアや細胞膜などの他のオルガネラ膜に運ばれる。細胞増殖・分裂の過程でオルガネラ膜にPCが正しく分配される機構を明らかにするために、本年度は、クリックケミストリーとフローサイトメトリーを利用して、ミトコンドリアへのPC輸送に関するスクリーニング検討を実施した。アジド基を導入したコリンを出発物質として生合成されるアジド含有PCの細胞内分布について、小胞体・ゴルジ体について蛍光標識し、同時に、別の蛍光波長で、ミトコンドリアについて標識した細胞について検討した。ゲノムスケールCRISPR-KOライブラリーを発現するK562細胞のプールから、小胞体・ゴルジ体のPC量に対してミトコンドリアPC量が減少した変異細胞をフローサイトメトリーにより選抜した。次世代シーケンサーによる解析および個別の遺伝子のCRISPR-KOの再解析を通じて、スクリーニングの表現型を示す遺伝子を同定した。解析の結果、リン脂質を細胞内で輸送することが知られるSTARD7が得られ、STARD7を欠損する細胞では、小胞体・ゴルジ体のPC量に対してミトコンドリアPC量が顕著に減少していることを実際に検出した。また、これと同様の表現型を示すものとして、PELOも同定した。PELOはミトファジーに関わることが知られており、さらにPELO欠損K562細胞は細胞増殖に遅延が認められた。この事より、ミトコンドリアへのPC分配と細胞増殖のバランス維持にPELOが関与する可能性が示唆された。