エキシマー蛍光による高選択的キラルアミノ酸分析法構築と統合失調症の早期診断法開発

生体内のD-アミノ酸酸化酵素（DAO）およびD-アスパラギン酸酸化酵素（DDO）の活性評価指標による統合失調症の早期かつ客観的診断を可能とするため、2022年度は予備試験でDAO活性変化に伴う尿中含量変化を示した非タンパク質構成アミノであるオルニチンを対象としてエキシマー蛍光誘導体化条件の検討および分離条件検討を行った。エキシマー蛍光誘導体化に用いるピレン試薬としてアミノ基を対象とした蛍光誘導体化試薬である4-(1-Pyrene)butyric acid N-hydroxysuccinimide(PSE) を選定し、反応温度、反応時間および溶媒について検討して最適条件を得た。非タンパク質構成アミノ酸であるオルニチンの生体内含量は極めて低いため、微量成分の高選択的分析を可能とする二次元HPLCシステムを利用して分析法を構築した。一次元目の逆相分離に微粒子充填型カラムを用い、二次元目の光学分割についてはパークル型キラル固定相5種を用いてPSE誘導体化オルニチンの分離検討を行った結果、二次元目において分離度1.7以上の良好な光学分割を達成した。これらの条件を用いて二次元HPLC分析システムを構築し、ヒト尿試料分析に適用した。ピレン誘導体化オルニチンをエキシマー蛍光波長（励起波長345 nmにおける475 nmの蛍光発光）で検出することにより、他の内在性化合物の影響を受けることなくオルニチン鏡像異性体のピーク検出が可能であった。

生体内のD-アミノ酸酸化酵素（DAO）およびD-アスパラギン酸酸化酵素（DDO）の活性評価指標による統合失調症の早期かつ客観的診断を可能とするため、2022年度は予備試験でDAO活性変化に伴う尿中含量変化を示した非タンパク質構成アミノであるオルニチンを対象としてエキシマー蛍光誘導体化条件の検討および分離条件検討を行った。エキシマー蛍光誘導体化に用いるピレン試薬としてアミノ基を対象とした蛍光誘導体化試薬である4-(1-Pyrene)butyric acid N-hydroxysuccinimide(PSE) を選定し、反応温度、反応時間および溶媒について検討して最適条件を得た。非タンパク質構成アミノ酸であるオルニチンの生体内含量は極めて低いため、微量成分の高選択的分析を可能とする二次元HPLCシステムを利用して分析法を構築した。一次元目の逆相分離に微粒子充填型カラムを用い、二次元目の光学分割についてはパークル型キラル固定相5種を用いてPSE誘導体化オルニチンの分離検討を行った結果、二次元目において分離度1.7以上の良好な光学分割を達成した。これらの条件を用いて二次元HPLC分析システムを構築し、ヒト尿試料分析に適用した。ピレン誘導体化オルニチンをエキシマー蛍光波長（励起波長345 nmにおける475 nmの蛍光発光）で検出することにより、他の内在性化合物の影響を受けることなくオルニチン鏡像異性体のピーク検出が可能であった。