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Analysis on the function of prostacyclin synthase expressed in macrophages in inflammatory diseases

巨噬细胞表达的前列环素合酶在炎症性疾病中的功能分析

基本信息

批准号：
22K15283
负责人：
落合翔
金额：
$ 3万
依托单位：
Showa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

2022年度は、主にマクロファージ (Mf) におけるPGISの機能について解析した。まずMf分化時におけるPGISの機能について、骨髄由来Mf (BMDM) を用い検討した。野生型およびPGIS遺伝子欠損マウスから骨髄細胞を採取し、M-CSF添加によりM0細胞を作成した。さらにM0細胞をLPS +IFNγ添加によりM1細胞に、IL-4添加によりM2細胞に分化させた。リアルタイムPCR 法によりM1マーカーであるiNOS、M2マーカーであるYm-1の遺伝子発現を解析したところ、これらM1, M2マーカーの発現量にPGIS欠損による影響は見られなかった。このことから、PGISのM1, M2分化への影響は軽微であると考えられた。次にプロスタグランジン (PG) 産生酵素の発現量を検討したところ、M1細胞ではM0, M2細胞と比較し、COX-2やmPGES-1の遺伝子発現の増加が見られた。一方、M2細胞においてはPGISやCOX-1の遺伝子発現がM0, M1細胞と比較して増加していた。これらの細胞におけるPG産生をLC-MS/MSを用いて解析したところ、M0, M1, M2細胞いずれにおいても、PGE2が最も多く検出されたが、PGI2の安定代謝物である6-keto-PGF1aは最も産生量が少なかった。次に、細胞の起源によりPG産生能が異なると考え、マウス腹腔内細胞から腹腔内Mfを調製し検討に用いた。腹腔内MfでのPG産生量について検討したところ、BMDMと異なり6-keto-PGF1aが最も多く検出された。腹腔内MfにM1分化に必要なLPS +IFNγ刺激、M2分化に必要なIL-4刺激を行ったところ、M2細胞においてPGISの遺伝子発現が増加した。以上のことから、PGISはM1細胞と比較しM2細胞において多く発現し、M2細胞はM1細胞よりもPGI2産生能が高いことが考えられた。

In 2022, the main function of PGIS (Mf) is analyzed.まずMf differentiation time におけるPGISのfunction について, bone marrow origin Mf (BMDM) い検した. The wild-type PGIS gene was harvested from depleted MAKIS cells and produced from M-CSF-added M0 cells. Differentiation of Hakko M0 cells and Hakko M1 cells added with LPS + IFNγ, and Hakko M2 cells added with IL-4 were performed.リアルタイムPCR法によりM1マーカーであるiNOS、M2マーカーであるYm-1の缝子発appearsをanalyticsしたところ、これらM1, The actual amount of M2 damage caused by PGIS loss is affected by the loss.このことから、PGISのM1, M2 differentiation へのeffectは軽微であると考えられた. Submersible enzyme (PG) enzyme-producing enzyme, M1 cell, M0, The comparison of M2 cells and COX-2 and mPGES-1 is the result of the increase in the number of cells. On the one hand, M2 cells are the same as PGIS and COX-1 are the same as M0, and M1 cells are the same. The これらのcell におけるPG is produced and LC-MS/MS is analyzed by いてしたところ、M0, M1, M2 cells have high production capacity, PGE2 has high production capacity, and PGI2 stable metabolite has low production volume. Second, the origin of the cell is the PG production energy, and the intraperitoneal cell is the intraperitoneal Mf modulation. The intra-abdominal MfでのPG production amount is the same as the amount of BMDM, and the amount of BMDM is the same as 6-keto-PGF1a. Intraperitoneal Mf requires LPS + IFNγ stimulation for M1 differentiation, IL-4 stimulation for M2 differentiation, and M2 cells for PGIS. The above results are compared with those of M1 cells and M2 cells, and the PGI2 production capacity of M2 cells and M1 cells is high.