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Analysis on the function of prostacyclin synthase expressed in macrophages in inflammatory diseases

巨噬细胞表达的前列环素合酶在炎症性疾病中的功能分析

基本信息

批准号：
22K15283
负责人：
落合翔
金额：
$ 3万
依托单位：
Showa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

2022年度は、主にマクロファージ (Mf) におけるPGISの機能について解析した。まずMf分化時におけるPGISの機能について、骨髄由来Mf (BMDM) を用い検討した。野生型およびPGIS遺伝子欠損マウスから骨髄細胞を採取し、M-CSF添加によりM0細胞を作成した。さらにM0細胞をLPS +IFNγ添加によりM1細胞に、IL-4添加によりM2細胞に分化させた。リアルタイムPCR 法によりM1マーカーであるiNOS、M2マーカーであるYm-1の遺伝子発現を解析したところ、これらM1, M2マーカーの発現量にPGIS欠損による影響は見られなかった。このことから、PGISのM1, M2分化への影響は軽微であると考えられた。次にプロスタグランジン (PG) 産生酵素の発現量を検討したところ、M1細胞ではM0, M2細胞と比較し、COX-2やmPGES-1の遺伝子発現の増加が見られた。一方、M2細胞においてはPGISやCOX-1の遺伝子発現がM0, M1細胞と比較して増加していた。これらの細胞におけるPG産生をLC-MS/MSを用いて解析したところ、M0, M1, M2細胞いずれにおいても、PGE2が最も多く検出されたが、PGI2の安定代謝物である6-keto-PGF1aは最も産生量が少なかった。次に、細胞の起源によりPG産生能が異なると考え、マウス腹腔内細胞から腹腔内Mfを調製し検討に用いた。腹腔内MfでのPG産生量について検討したところ、BMDMと異なり6-keto-PGF1aが最も多く検出された。腹腔内MfにM1分化に必要なLPS +IFNγ刺激、M2分化に必要なIL-4刺激を行ったところ、M2細胞においてPGISの遺伝子発現が増加した。以上のことから、PGISはM1細胞と比較しM2細胞において多く発現し、M2細胞はM1細胞よりもPGI2産生能が高いことが考えられた。

In 2022, the main function of PGIS was analyzed. When Mf is differentiated, the function of PGIS is discussed, and the function of Mf (BMDM) is discussed Wild-type PGIS gene is not damaged, and M0 cells are produced by M-CSF addition. LPS +IFNγ addition to M0 cells caused differentiation of M1 cells and IL-4 addition caused differentiation of M2 cells. The PCR method is used to analyze the gene expression of Ym-1 in M1, M2 and PGIS. PGIS M1, M2 differentiation and influence of. The expression of PG-producing enzymes in M1 cells, M0 cells and M2 cells increased compared with that in COX-2 and mPGES-1 cells. The expression of COX-1 gene in M0 and M1 cells increased significantly. PG production in these cells was analyzed by LC-MS/MS, M0, M1, M2 cells, and PGE2 cells were most frequently detected, while 6-keto-PGF1a, a stable metabolite of PGI2, was least frequently detected. Next, the origin of PG production can be different from that of cells in the abdominal cavity, and the modulation of MF in the abdominal cavity can be used. The amount of Mf and PG produced in the abdominal cavity was the most frequently detected, while BMDM and 6-keto-PGF1a were the most frequently detected. LPS +IFNγ stimulation was necessary for M1 differentiation, IL-4 stimulation was necessary for M2 differentiation, and PGIS gene expression was increased in M2 cells. The above mentioned PGIS cells are more likely to be produced than M2 cells, and M2 cells are more likely to be produced than M1 cells.