炎症性メディエーターに着目したピロリ菌による炎症性発癌機構の解明

以炎症介质阐明幽门螺杆菌炎症致癌机制

• 批准号: 22K15356
• 负责人: 久保 修一
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Oita University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15356/
• 关键词: ピロリ菌; 炎症; CagA毒素蛋白質; 脂質メディエーター; 慢性炎症; 胃癌

① CagA遺伝子発現による細胞外S1Pの増加を確認した我々はこれまでレンチウイルス感染系により、CagA遺伝子を発現した胃粘膜上皮細胞株AGSでは、細胞内スフィンゴシン-1-リン酸（以下S1Pと略す）が増加することを明らかにしてきた。さらに細胞外へ放出されるS1P量がCagA遺伝子発現に伴い増加するかを解析するため、レンチウイルスを感染させたAGS胃細胞株の培養上清中のS1P量を液体クロマトグラフィー質量分析法により測定し、培養上清においてもS1Pが顕著に増加していることを確認した。② CagA遺伝子を欠失させた変異型ピロリ菌株の作成細胞内外S1P量の増加が、CagA陽性のピロリ菌感染によっても認められるかを確認する目的で、CagA陽性の野生型ピロリ菌からCagA遺伝子のみを欠失させた変異型株を樹立した。これらの株をAGS胃細胞株へ感染させ、抗CagA抗体を用いたWestern blottingによりCagA遺伝子の欠失を確認した後、細胞内外のS1P量を測定した。細胞内S1P量には両者間でほとんど差が認められなかったが、野生型ピロリ菌を感染させた培養上清では、CagA欠失変異型ピロリ菌と比較して有意なS1P量の増加が認められた。③ CagA遺伝子発現細胞の培養上清によって、免疫担当細胞の遊走が強く誘導された。レンチウイルス感染系、およびピロリ菌感染系を用いてAGS胃細胞株へCagAを発現させ、得られた培養上清の免疫担当細胞（単球由来細胞THP-1）の遊走誘導活性をBoyden　Chamber assayにより測定した。いずれの感染系においても、CagAを発現したAGS胃細胞株の培養上清では、発現していない細胞の培養上清と比較して遊走したTHP-1数に有意な増加が認められた。この知見をさらに強固にするため、現在S1Pの阻害剤を併用した確認実験を継続して進めている。

1) traces of CagA 伝 son 発 now に よ る extracellular S1P の raised plus を confirm し た I 々 は こ れ ま で レ ン チ ウ イ ル ス infection department に よ り, traces of CagA 伝 son を 発 now し た gastric mucosa epithelial cell lines AGS で は, intracellular ス フ ィ ン ゴ シ ン - 1 - リ ン acid (S1P と slightly す) が raised plus す る こ と を Ming ら か に し て き た. さ ら に extracellular へ release さ れ る S1P quantity が CagA posthumous son 伝 発 now に with い raised す る か を parsing す る た め, レ ン チ ウ イ ル ス を infection さ せ た AGS gastric cell line の culture supernatant of の S1P quantity を liquid ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー quality analysis に よ り determination し, culture supernatant に お い て も S1P が 顕 with に raised し て い る こ Youdaoplaceholder0 confirm that た. (2) the traces of CagA 伝 を owe son lost さ せ た - alien ピ ロ リ strains の made cells inside and outside the S1P in の raised add が, CagA positive の ピ ロ リ fungus infection に よ っ て も recognize め ら れ る か を confirm す る purpose で, CagA positive の wild-type ピ ロ リ bacteria か ら CagA heritage 伝 son の み を owe lost さ せ た - different strains を set し た. こ れ ら の strains を AGS gastric cell line へ infection さ せ, resisting を CagA antibody with い た Western blotting に よ り CagA heritage 伝 の owe son lost を confirm し た, cells inside and outside after の を S1P quantity determination し た. Amount of cellular S1P に は struck between those で ほ と ん ど poor が recognize め ら れ な か っ た が, wild type ピ ロ を リ bacteria infection さ せ た culture supernatant で は, loss CagA owe - alien ピ ロ リ bacteria と compare し て intentionally な S1P in の raised add が recognize め ら れ た. ③ CagA's 伝 offspring appear in the cell <s:1> culture supernatant によって, and the immune-responsible cell <e:1> migrates が, strongly く inducing された. レ ン チ ウ イ ル ス infection, お よ び ピ ロ を リ fungus infection department with い て AGS gastric cell line へ CagA を 発 now さ せ, ら れ た culture supernatant の bear immune cells (origin cells THP 単 ball - 1) の wander induction activity を BoydenChamber assay に よ り determination し た. い ず れ の infection department に お い て も, CagA を 発 now し た AGS gastric cell line の culture supernatant で は, 発 し て い な の い cell culture supernatant と compare し て wander し た THP 1 number に intentionally な raised plus が recognize め ら れ た. The <s:1> <s:1> knowledge is をさらに strengthened にするため, and now the S1P <s:1> harm inhibitor is を and the <s:1> た confirmation experiment を継続 て enters めて る る る.