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細胞内のレドックスバランスを制御するChaCファミリーの病態生理機能の解明

阐明控制细胞内氧化还原平衡的 ChaC 家族的病理生理功能

基本信息

批准号：
22K15388
负责人：
本間拓二郎
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Osaka Metropolitan University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

本研究では、ゲノム編集によりChaCファミリーの遺伝子欠損マウスを作製し、その表現型を解析することで、GSH代謝におけるChaCの生体内機能を明らかにする。また、ChaC欠損マウスの解析に加えて、我々が最近樹立したCNDP2との二重欠損マウスを作出し、GSH代謝との相互作用について調べる。さらにこうしたマウスに対する小胞体ストレス誘導剤やGSH枯渇ストレスの影響についても検討し、ChaCファミリーの欠損が各種病態に与える影響を明らかにする予定である。以上の検討により、ChaCファミリーの本来の生理機能を解明し、GSH再利用系の障害が各種病態に及ぼす影響を明らかにすることを目指している。まず、今年度は、マウス生体内でのChaCファミリーのGSH代謝における役割とChaC1・CNDP2を介したGSH再利用系の障害がレドックスバランスの維持に影響を与えることで生体にどのような結果をもたらすかを明らかにするために、ChaC1欠損マウスをゲノム編集により作出することを目指した。初めに、ChaC1遺伝子のexon 1を標的としたガイドRNAおよびCas9ヌクレアーゼを受精卵に導入し、変異の入った個体を作製した。マウス尾の電気泳動およびシーケンス解析の結果、異なる変異をもつゲノム編集マウスを数種得た。いずれもがヘテロ欠損マウスであり、主要臓器を用いたウェスタンブロット解析の結果、ChaC1タンパク質量に違いが認められなかった。その後、ヘテロ欠損個体同士を掛け合わせることで、ChaC1ホモ欠損マウスを２ライン作出することに成功した。いずれのラインも、ChaC1遺伝子が完全欠損しているのに関わらず、正常に発生して生存可能であることが明らかになった。また、今のところ、通常飼育環境で外見や行動観察上異常を認めず、生殖系に影響を与えていない。

In this study, we investigated the role of ChaC in the metabolism of GSH in vivo by analyzing the phenotype of ChaC and its gene deficiency. The most recent establishment of CNDP2 is the interaction between GSH metabolism and its causes. In addition, the effect of GSH on the microcellular structure induced by GSH is discussed in detail, and the effect of GSH on the microcellular structure induced by GSH is discussed in detail. The above discussion indicates that the physiological functions of ChaC and GSH reuse are explained, and the obstacles to various pathological conditions and effects are explained. This year, ChaC1·CNDP2 is involved in the GSH metabolism in vivo, and the GSH reuse system is affected by the maintenance of ChaC1·CNDP2 in vivo. For example, if you want to introduce an exon1 gene into a fertilized egg, you can control it. The results of the analysis of the electrical activity of the tail, the variation of the structure and the compilation of the structure are obtained. In the middle of the game, the game is not easy to play, the game is not easy to play. After a while, the individual who lost his job was able to make a success of it. In the middle of the day, ChaC1 gene is completely damaged, and normal survival is possible. In general, the breeding environment is observed externally, the behavior is observed, and the abnormality is recognized. The reproductive system is affected.